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[求助]
多糖的除蛋白問題
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| 大家好: 想問大家一個問題,我在對水提的蟲草多糖進行除蛋白時,除蛋白前紫外檢測的時候200-400nm之間沒有峰吸收 ,曲線很平穩(wěn),只是快要到200即接近縱軸的時候曲線急劇的上升。之后我又用胰蛋白酶處理了三次,離心時有少量的白色沉淀,然后我又用savege法處理了4次,此時中間層看不到有白色絮狀物,我認為蛋白除干凈了,可紫外的時候曲線形狀和除蛋白前一樣,沒有變化,只是在260nm和280nm處的吸光度變大了。之前我的材料用80%的乙醇回流提取過,可是我查了80%的乙醇只能除去一些色素、小分子的化合物、單糖和一些低聚糖等,不會除去蛋白的呀,處理前和處理后分別茚三酮顏色反應(yīng)也不明顯,要說沒有蛋白不可能的呀,那我savege法處理的時候中間那絮狀物是什么呀?是不是我操作錯了還是?希望有做過的同仁們能給指點一下,麻煩大家了! |

金蟲 (正式寫手)
送紅花一朵 |
非常謝謝,我把多糖溶解在水里,我沒有木瓜蛋白酶,用的是胰蛋白酶,它的水解條件好像是PH=7.8-8.1,我沒有調(diào)節(jié)PH,直接在50℃水浴4小時,酶法我處理了3次,然后4次SEVAG法處理,就看不到變性蛋白了,而且我的溶液顏色還淺了很多,透亮透亮的,我想問下此法是不是還可以出去部分色素,還是我的糖少了?我昨天重復(fù)做了一遍,除蛋白前260nm和280nm處有峰,很小,除蛋白后平了很多,是不是證明蛋白除去了很多?還是要求此處的吸收度要小于某個值?我的縱坐標最大值設(shè)置的是2.5,這個縱坐標最大值設(shè)置有什么具體的規(guī)定嗎?非常謝謝! |
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