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wycf2013新蟲 (初入文壇)
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[求助]
過大孔樹脂分離在放線菌次級代謝產(chǎn)物中的酶抑制劑
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| 我是從放線菌次級代謝產(chǎn)物中篩選酶的抑制劑，現(xiàn)在我想過大孔樹脂分離一下，只有強極性的S-8可以吸附，但是沒解吸下來東西，我是從水，20%乙醇，40%，60%，80%，100%乙醇梯度洗脫，外加了無水甲醇洗脫，都沒有東西。請問各位洗脫劑還有其他的么？ 水算不算？因為我測抑制活性的時候，好像水洗下來的東西有點抑制作用，其他都沒有抑制作用�，F(xiàn)在很愁，還在嘗試其他樹脂，已經(jīng)有5中舍棄了。 |
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★
xiaoxiao270: 金幣+1, 3Q 2012-04-08 12:39:45
xiaoxiao270: 金幣+1, 3Q 2012-04-08 12:39:45
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2樓2012-04-08 12:09:19
ayixin731
木蟲 (正式寫手)
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3樓2012-04-08 14:32:33
4樓2012-04-08 17:55:51
wycf2013
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5樓2012-04-10 13:49:32
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6樓2012-04-10 13:50:34
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7樓2012-04-11 10:08:58
8樓2012-04-11 13:21:29
| 其實美國Union Biometrica 公司出品的COPAS大顆粒流式分選系統(tǒng)可以做酶抑制劑的篩選。主要原理是：首先，將帶有淬滅熒光基團(FRAP )的蛋白酶底物多肽連接在微球的一部分結(jié)合位點上，然后將需要篩選的抑制劑連接在微球的其它結(jié)合位點上，從而建立一個以微球為載體的抑制劑庫。將微球與蛋白酶一起孵育，如果抑制劑無效，蛋白酶會將多肽切斷，微球產(chǎn)生較強的熒光信號。如果抑制劑效果很強，蛋白酶無法切斷多肽，微球沒有熒光信號。如果抑制劑無法完全抑制蛋白酶活性，那么仍會有部分多肽被切斷，微球會發(fā)出較弱的熒光信號。這樣就可以利用COPAS大顆粒流式分選系統(tǒng)根據(jù)微球熒光信號的強弱對微球進行分選，從而快速找到不同抑制強度的抑制劑。這種技術(shù)在篩選抑制劑和優(yōu)化反應條件方面具有很高的效率和很大的靈活性，可以實現(xiàn)每小時100000個化合物的高速篩選。利用這種技術(shù)，荷蘭的一個研究小組在數(shù)周內(nèi)找到了胰蛋白酶和多種基質(zhì)金屬蛋白酶的多種抑制劑。 |
9樓2012-04-11 13:50:08
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