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lydia320新蟲 (初入文壇)
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[求助]
瞬轉(zhuǎn)中,質(zhì)粒在細(xì)胞里會(huì)復(fù)制嗎?
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| 在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染中,轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中的質(zhì)粒會(huì)隨著細(xì)胞的增值而復(fù)制增多嗎?轉(zhuǎn)染多久之后質(zhì)?赡軙(huì)降解啊?檢測(cè)質(zhì)粒表達(dá)的蛋白,在轉(zhuǎn)染后多久給藥刺激質(zhì)粒轉(zhuǎn)錄,多久后是蛋白表達(dá)的高峰呢?請(qǐng)各位高人多多指教! |
分子生物學(xué) 質(zhì)粒提取 |
木蟲 (正式寫手)
小蟲
| 質(zhì)粒當(dāng)然不會(huì)復(fù)制啊,瞬時(shí)表達(dá),瞬轉(zhuǎn)質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞后,基因不整合到細(xì)胞自身染色體上,因此會(huì)隨著細(xì)胞的生長(zhǎng)分裂,質(zhì)粒會(huì)逐漸丟失,只有進(jìn)行穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的時(shí)候,質(zhì);虿拍苷系募(xì)胞染色體上 |

金蟲 (小有名氣)
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轉(zhuǎn)細(xì)胞的質(zhì)粒是不會(huì)復(fù)制的,真核生物沒有這種機(jī)制,只有整合到基因組的才會(huì)隨著細(xì)胞增殖而復(fù)制。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染能維持一周就不錯(cuò)了。 蛋白表達(dá)嘛,要看細(xì)胞和質(zhì)粒而定了。一般情況下轉(zhuǎn)染24~48h后檢測(cè)會(huì)比較好。樓主參考文獻(xiàn)確定這個(gè)時(shí)間點(diǎn)吧。 |
專家顧問 (職業(yè)作家)
T.Shen
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專家經(jīng)驗(yàn): +57 |

金蟲 (小有名氣)
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質(zhì)粒復(fù)制與否取決于你用的瞬轉(zhuǎn)系統(tǒng)。 有兩個(gè)高表達(dá)的瞬轉(zhuǎn)系統(tǒng)是能夠保證質(zhì)粒復(fù)制的: 基于SV40病毒大T抗原的復(fù)制系統(tǒng),如:HEK293T + 含SV40復(fù)制原點(diǎn)的質(zhì)粒系統(tǒng) 基于EBV病毒EBNA1蛋白的復(fù)制系統(tǒng),如:HEK293E+含EBV復(fù)制原點(diǎn)的質(zhì)粒系統(tǒng) 其他的瞬轉(zhuǎn)系統(tǒng)應(yīng)該是不能復(fù)制,因而表達(dá)量低 |
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