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白小鐵鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
掃描電鏡樣品預處理問題。。。 已有1人參與
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小女子第一次做掃描電鏡，準備看菌絲的侵染過程。看了protocol后還很是迷茫。。。我們電鏡室要求樣品要先固定完，梯度脫水完再送過去。 那么1、固定用的2.5%戊二醛必須要用電鏡專用的嗎？分析純的可以嗎? 2、用戊二醛固定時，有人告訴我要抽真空。但我們實驗室沒有那個真空泵。人家又告訴我可以用針筒慢慢抽，請問如果用針筒會不會對菌絲形態(tài)造成破壞。。。還有，要抽到什么程度才算是固定完成？ 3、梯度脫水（乙醇）時，濃度梯度間隔一般是多少？操作時就是直接丟到乙醇里十五分鐘到半個小時再撈出來再丟到下一個梯度的乙醇里就可以了嗎？ 謝謝各位蟲子！�。�！ |
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ori_gin
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木有人應助哇 2樓2013-02-14 22:32:11
xintutiao
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
laozuzunzhe: 金幣+5, good! 2013-02-23 11:14:11
laozuzunzhe: 金幣+5, good! 2013-02-23 11:14:11
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樓主不必過于擔心 微生物的固定其實很簡單 戊二醛就是很好的固定劑 不過我有一個疑問 一般實驗室常買的戊二醛都是25%的水溶液 不知樓主所說是不是這種情況 建議樓主先配一瓶0.2M 磷酸鹽緩沖液 （ph=7）取50ml緩沖液 加上10ml 25%的戊二醛水溶液 用DI water加到總體積為100ml 此時樓主即可得到0.1M 2.5%的戊二醛固定計了 把你的樣品放到固定劑里 靜置4h 就行了 或者放到4°冰箱過夜 到時間后取出 再用磷酸也緩沖液淋洗3次 再依次放入 30% 40 % 50% 60% 70% 80% 90 % 100% 的乙醇水溶液中 在每個溶液中靜止30min 就完成了梯度脫水（ ps 我有時時間緊只待20min 覺得效果也不錯） 這樣樓主的預處理就做完了 拿到掃描電鏡那里 后續(xù)的干燥和噴金都交給他們來完成啦~ |
3樓2013-02-22 22:40:46
【答案】應助回帖
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你好，小白求教很基礎的問題，，樣品清洗固定脫水都用離心管，是吧？必須用玻璃離心管么，塑料的可以么？ 后面的干燥，是不是要放在載玻片上��？還是玻璃培養(yǎng)皿之類的…莫笑 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-07-31 16:35:52
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