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白小鐵鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
掃描電鏡樣品預(yù)處理問題。。。 已有1人參與
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小女子第一次做掃描電鏡，準(zhǔn)備看菌絲的侵染過程�？戳藀rotocol后還很是迷茫。。。我們電鏡室要求樣品要先固定完，梯度脫水完再送過去。 那么1、固定用的2.5%戊二醛必須要用電鏡專用的嗎？分析純的可以嗎? 2、用戊二醛固定時(shí)，有人告訴我要抽真空。但我們實(shí)驗(yàn)室沒有那個(gè)真空泵。人家又告訴我可以用針筒慢慢抽，請問如果用針筒會(huì)不會(huì)對菌絲形態(tài)造成破壞。。。還有，要抽到什么程度才算是固定完成？ 3、梯度脫水（乙醇）時(shí)，濃度梯度間隔一般是多少？操作時(shí)就是直接丟到乙醇里十五分鐘到半個(gè)小時(shí)再撈出來再丟到下一個(gè)梯度的乙醇里就可以了嗎？ 謝謝各位蟲子！�。。� |
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xintutiao
金蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
laozuzunzhe: 金幣+5, good! 2013-02-23 11:14:11
laozuzunzhe: 金幣+5, good! 2013-02-23 11:14:11
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樓主不必過于擔(dān)心 微生物的固定其實(shí)很簡單 戊二醛就是很好的固定劑 不過我有一個(gè)疑問 一般實(shí)驗(yàn)室常買的戊二醛都是25%的水溶液 不知樓主所說是不是這種情況 建議樓主先配一瓶0.2M 磷酸鹽緩沖液 （ph=7）取50ml緩沖液 加上10ml 25%的戊二醛水溶液 用DI water加到總體積為100ml 此時(shí)樓主即可得到0.1M 2.5%的戊二醛固定計(jì)了 把你的樣品放到固定劑里 靜置4h 就行了 或者放到4°冰箱過夜 到時(shí)間后取出 再用磷酸也緩沖液淋洗3次 再依次放入 30% 40 % 50% 60% 70% 80% 90 % 100% 的乙醇水溶液中 在每個(gè)溶液中靜止30min 就完成了梯度脫水（ ps 我有時(shí)時(shí)間緊只待20min 覺得效果也不錯(cuò)） 這樣樓主的預(yù)處理就做完了 拿到掃描電鏡那里 后續(xù)的干燥和噴金都交給他們來完成啦~ |
3樓2013-02-22 22:40:46
ori_gin
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木有人應(yīng)助哇 2樓2013-02-14 22:32:11
【答案】應(yīng)助回帖
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你好，小白求教很基礎(chǔ)的問題，，樣品清洗固定脫水都用離心管，是吧？必須用玻璃離心管么，塑料的可以么？ 后面的干燥，是不是要放在載玻片上��？還是玻璃培養(yǎng)皿之類的…莫笑 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-07-31 16:35:52
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