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thestormcong銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
二次pcr產(chǎn)物
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大家好，現(xiàn)在在做red基因敲除。最近在準(zhǔn)備打靶片段。我的第一輪pcr產(chǎn)物切膠回收，dpnI酶切，再次切膠回收。本來是用來打靶的，可是電泳后發(fā)現(xiàn)亮度不夠。于是就想以該產(chǎn)物為模板，進(jìn)行二次pcr，可是二次pcr后沒有發(fā)現(xiàn)目的條帶，糾結(jié)。 圖一：第一道為打靶片段（切膠回收，酶切，再次切膠回收，上樣量2ul） 中間道為宿主里的pkd46質(zhì)粒（我加大了提取量），第三道m(xù)arker，從下往上marker分別為750,1000,2000bp。marker的濃度為50ng/5ul（我上樣5ul）。大家覺得我這樣的濃度可行嗎？如果不行的話我就要重做一次 圖二：二次pcr產(chǎn)物后的條帶，marker最下方兩條為200，100bp。 戰(zhàn)友們有沒有得到高濃度打靶片段的方法，我現(xiàn)在的想法是想以打靶片段為模板進(jìn)行二次pcr，因為這樣會節(jié)省一點dpnI，dpnI好像一根用不了幾次。 可是二次pcr得不到產(chǎn)物了。糾結(jié)。。。。。 大家給點建議吧，先行謝過�。� 圖一 圖二 |
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cheng_xiao
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3樓2012-04-12 14:10:22
thestormcong
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2樓2012-04-12 12:15:05
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