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majunyang銀蟲 (初入文壇)
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[交流]
蛋白活性電泳-質(zhì)譜鑒定 已有2人參與
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最近在做非變性活性電泳，遇到些問題不知怎么解決。我的實(shí)驗(yàn)步驟如下： 1.電泳：分離膠交聯(lián)濃度12%，加SDS，與普通變性膠一樣，濃縮膠不加SDS，上樣緩沖液和電泳緩沖液均不加SDS。冰水混合物中電泳，電壓100v. 2.洗去SDS：2.5%Triton X-100 振蕩1h.之后pH7.2磷酸鹽緩沖液洗3次。 3.反應(yīng)：50度下 泡在酪蛋白溶液中反應(yīng)30min. 4.考染脫色 如圖： 兩種樣品，空白區(qū)域太大，可能是酶活高，未稀釋。 另外，我想拿膠去做質(zhì)譜鑒定，不知可不可以。酶將酶本身及周圍區(qū)域的酪蛋白和周圍的蛋白（？會(huì)不會(huì)分解周圍原有的蛋白）都分解，顯示白色，做個(gè)對照不加酪蛋白的對比下，看哪個(gè)條帶繼續(xù)存在就是酶的條帶，不知對不對？然后去鑒定。 這兩張圖，貌似也看不出來。還有什么好的辦法啊。我就想弄清同工酶的種類。 |
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2樓2012-04-15 18:58:57
majunyang
銀蟲 (初入文壇)
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4樓2014-04-28 13:01:06
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