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majunyang銀蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
蛋白活性電泳-質(zhì)譜鑒定 已有2人參與
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最近在做非變性活性電泳，遇到些問(wèn)題不知怎么解決。我的實(shí)驗(yàn)步驟如下： 1.電泳：分離膠交聯(lián)濃度12%，加SDS，與普通變性膠一樣，濃縮膠不加SDS，上樣緩沖液和電泳緩沖液均不加SDS。冰水混合物中電泳，電壓100v. 2.洗去SDS：2.5%Triton X-100 振蕩1h.之后pH7.2磷酸鹽緩沖液洗3次。 3.反應(yīng)：50度下 泡在酪蛋白溶液中反應(yīng)30min. 4.考染脫色 如圖： 兩種樣品，空白區(qū)域太大，可能是酶活高，未稀釋。 另外，我想拿膠去做質(zhì)譜鑒定，不知可不可以。酶將酶本身及周?chē)鷧^(qū)域的酪蛋白和周?chē)牡鞍祝�？�?huì)不會(huì)分解周?chē)械牡鞍祝┒挤纸猓@示白色，做個(gè)對(duì)照不加酪蛋白的對(duì)比下，看哪個(gè)條帶繼續(xù)存在就是酶的條帶，不知對(duì)不對(duì)？然后去鑒定。 這兩張圖，貌似也看不出來(lái)。還有什么好的辦法啊。我就想弄清同工酶的種類(lèi)。 |
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hn0313
新蟲(chóng) (初入文壇)
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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最近做的非變性蛋白電泳，12%的分離膠，條帶不往下跑而且有的地方脫色脫不掉，后來(lái)用8%的分離膠，顏色根本就脫不掉是怎么回事？下面前面是12%時(shí)的膠非變性膠，兩邊的泳道是變性maker，只是用來(lái)檢測(cè)，沒(méi)有標(biāo)記作用的；后面的是跑的變性的。而且變性蛋白電泳的條帶在非變性中跑不出來(lái)。。請(qǐng)專(zhuān)業(yè)人士幫忙解決一下。。。非常感謝�。�！ Native-PAGE 12% 0415-2.jpg SDS-PAGE 12% 0416-1.JPG |
4樓2014-04-28 13:01:06
冼亮淀粉酶
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2樓2012-04-15 18:58:57
majunyang
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3樓2012-04-17 10:42:21
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