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menglinyan新蟲 (小有名氣)
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[求助]
做了半個月的RAPD標(biāo)記，為什么一條帶都沒有啊，速救！
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在做麥冬的分子標(biāo)記，是RAPD，按道理說，這個技術(shù)已經(jīng)很成熟了，可是我就是死活跑不出來?xiàng)l帶啊，做了半個月了，中間有次出來?xiàng)l帶了，但是都很模糊，我設(shè)置的溫度梯度是38-45之間，再低的都跑不出來，只有這個跑出來了一次。后來我用相同的DNA，引物，MIX，條件也相同，在做的時候又沒有條帶了。 我想問問大家： 1 引物會那么容易降解嗎？每次在加樣的時候才拿出來，就那么一會兒它會降解嗎，如果真的降解了，那之前還跑出來一次，怎么解釋。 2 溫度梯度一般都多少呢，RAPD標(biāo)記的溫度大概都一樣吧？應(yīng)該在36度左右吧，可是我跑了很多次34-38度都沒條帶，唯一的那次有條帶還是38-45度的。 我用的DNA都沒有問題，因?yàn)閹熋糜孟嗤腄NA做RAMP標(biāo)記，效果都很好。我想知道還有哪些方面是我沒有注意到的，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗的地方。 請大家?guī)蛶桶�，馬上都畢業(yè)了，實(shí)驗(yàn)還沒完，心里好著急，不能總是跑白板啊，我都快崩潰了，哎。  |
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