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ytulz111新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
表達(dá)載體構(gòu)建碰到詭異問(wèn)題，請(qǐng)各路大神不吝賜教，拜謝。
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事情是這樣，我要構(gòu)建一個(gè)表達(dá)載體，目的片段大約2000bp，后面要加GFP作為marker。篩出陽(yáng)性克隆來(lái)之后，提質(zhì)粒測(cè)序驗(yàn)證。這時(shí)詭異問(wèn)題出現(xiàn)了，因?yàn)槲疫@個(gè)基因比較大，需要用多個(gè)測(cè)序引物，比如A,B兩個(gè)引物。A為正向，B為反向，兩者有overlapping。從A的結(jié)果看，有一段是我的目的基因，而接下來(lái)的卻是載體的序列（比如A的測(cè)序結(jié)果是500bp，前200bp是我的目的基因的序列，201-500卻是載體的序列）。但是從B的結(jié)果看這500bp卻都是我的目的基因的序列。不知道這是什么原因啊。 PS.測(cè)序結(jié)果都很好，沒(méi)有雜峰和套峰。 如果問(wèn)題解決，本人愿贈(zèng)送100金幣作為酬謝。謝謝各位了。 |
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