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表達載體構(gòu)建碰到詭異問題，請各路大神不吝賜教，拜謝。
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事情是這樣，我要構(gòu)建一個表達載體，目的片段大約2000bp，后面要加GFP作為marker。篩出陽性克隆來之后，提質(zhì)粒測序驗證。這時詭異問題出現(xiàn)了，因為我這個基因比較大，需要用多個測序引物，比如A,B兩個引物。A為正向，B為反向，兩者有overlapping。從A的結(jié)果看，有一段是我的目的基因，而接下來的卻是載體的序列（比如A的測序結(jié)果是500bp，前200bp是我的目的基因的序列，201-500卻是載體的序列）。但是從B的結(jié)果看這500bp卻都是我的目的基因的序列。不知道這是什么原因啊。 PS.測序結(jié)果都很好，沒有雜峰和套峰。 如果問題解決，本人愿贈送100金幣作為酬謝。謝謝各位了。 |
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