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[求助]
求助啊求助，關(guān)于trypan blue臺盼藍(lán)染色的問題�。。�
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| 向各位高人求助，我是植物類病變的trypan blue臺盼藍(lán)染色，用的是臺盼藍(lán)-乳酚溶液，配方是2.5mg/ml的臺盼藍(lán)（sigma），25％乳酸，23％水飽和酚，25％的甘油和水。我試了好幾種方法，首先是葉片放入染料中在沸水浴中加熱10-20分鐘，然后觀察發(fā)現(xiàn)有病斑的地方還是深黃色其外圍的一圈白色也沒有被染上；第二種方法是直接在染料里煮10-15分鐘，發(fā)現(xiàn)還是與上一種方法差不多的結(jié)果；第三種方法就是直接浸在染料中光照，結(jié)果葉片蜷曲。請問用什么方法才能做出來呀，瘋了我，做了一個星期了�。�！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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染色液配方：10 ml 85%乳酸，10 ml水飽和酚，10 ml甘油，10 ml純水，15 mg trypan blue染料。 方法：取1 cm × 1 cm大小的煙草切片或擬南芥整張葉片放入24孔組培板中；加入trypan blue染液，真空抽濾使染液進(jìn)入細(xì)胞間隙；沸水煮沸5-8 min；室溫下靜置染色6-8 h；用2.5 g/ml的水合氯醛溶液脫色，直到組織完全透明為止；脫色好的葉片在Olympus顯微鏡下觀察，拍照，并統(tǒng)計死細(xì)胞數(shù)目。 希望能對樓主有所幫助。 |
5樓2012-04-26 14:58:35
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