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有關(guān)于DAPI染色的問題
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本人最近在做海水中細菌計數(shù)的實驗，用到的染料為DAPI（買來是10mg一小瓶粉末的那種），在操作中碰到幾個問題，想讓有經(jīng)驗的大蝦幫我看看操作是否正確~ 我的操作過程是：用10mL的無菌水將10mg的DAPI粉末稀釋成1mg/mL的工作液，置于-20℃下凍存，實驗時提前取出使其解凍，染色時抽濾水體到差不多剩3mL的時候加入20μL染液，黑暗下染5~10min后全部抽干凈水，再拿膜去觀察計數(shù)。問題有： 1、加入20μL DAPI染液，這個量合適嗎？ 2、每次實驗前都要拿DAPI出來解凍，也就是存在一個反復(fù)凍融的過程，這樣會不會不太好呢？ 3、一般在膜與載玻片之間要滴一滴鏡油，那么在膜與蓋玻片之間還需滴一滴鏡油嗎？ 我有滴過，但在觀察計數(shù)的時候常發(fā)現(xiàn)細菌會隨著油流動而不好計數(shù)，是否這滴油可以不加了？ 問題比較多，描述比較嘮叨，謝謝大家的幫助！ |
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2樓2013-09-25 08:41:24
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小木棉要努力: 金幣+20, ★★★很有幫助 2013-10-10 11:08:06
小木棉要努力: 金幣+20, ★★★很有幫助 2013-10-10 11:08:06
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1. DAPI的使用濃度0.4ug/mL足矣。 2. 建議可以配一個高濃度的儲存液和10*的工作液（4ug/mL），每次只需要把一小瓶工作液拿出融化即可。這樣就可防止每次都把所有的液體都拿出凍融一次。 3. 膜與載玻片之間需要加一點油，一點點就好，然后可以用手將油抹開，這樣再放膜就不容易到處跑，是為了好固定膜的。在蓋玻片滴2-3小滴油，蓋上后用手壓一下，感覺同樣是為了固定膜與蓋玻片的位置。 |
3樓2013-10-10 04:51:21
4樓2013-10-10 11:09:32
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