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[交流]
從微生物生理而言,可否可以讓凍干菌粉在常溫下保存
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凍干菌粉休眠的原理是什么? 有沒有可能讓凍干菌粉在常溫下繼續(xù)保持休眠狀態(tài)或者低代謝的狀態(tài)?(繼續(xù)控制菌粉濕度以及厭氧環(huán)境的話,唯一的變量就是溫度從-80度到25度。) 如果非要讓細(xì)菌在常溫下保存更長(zhǎng)時(shí)間,從細(xì)菌的生理角度來講,有什么思路可以借鑒的呢? 因?yàn)閷?duì)微生物不太了解,希望大家不吝賜教,最好推薦相關(guān)的書籍, 能提供電子版的就更是感激不盡啦。。 |
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木蟲之王 (文學(xué)泰斗)
| 凍干菌粉休眠的原理和動(dòng)物冬眠一樣,降低自身活性降低自身能量消耗以及代謝速度。試想,若外界環(huán)境達(dá)到生物最佳生活狀態(tài),且無任何營(yíng)養(yǎng)成分可供,生物必然會(huì)死亡,但微生物菌數(shù)量級(jí)很大,會(huì)有個(gè)別或少部分存活,一旦有適合條件依舊會(huì)繁殖生長(zhǎng),所以按理說不可行,建議做個(gè)長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn),7天,14天,28天等等 |
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金蟲 (小有名氣)
榮譽(yù)版主 (文壇精英)
禁蟲 (文學(xué)泰斗)
金蟲 (小有名氣)
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真空冷凍干燥法將微生物冷凍,在減壓下利用升華作用除去水分,使細(xì)胞的生理活動(dòng)趨于停止,從而長(zhǎng)期維持存活狀態(tài)。 操作步驟如下: 好氧菌冷凍干燥管的制備 1 安瓿管準(zhǔn)備 安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安瓿管時(shí),先用2%鹽酸浸泡過夜,自來水沖洗干凈后,用蒸餾水浸泡至pH中性,干燥后、貼上標(biāo)簽,標(biāo)上菌號(hào)及時(shí)間,加入脫脂棉塞后,121℃下高壓滅菌15-20分鐘,備用。 2 保護(hù)劑的選擇和準(zhǔn)備 保護(hù)劑種類要根據(jù)微生物類別選擇。配制保護(hù)劑時(shí),應(yīng)注意其濃度及pH值,以及滅菌方法。如血清,可用過濾滅菌;牛奶要先脫脂,用離心方法去除上層油脂,一般在100℃間歇煮沸2-3次,每次10-30分鐘,備用。 3 凍干樣品的準(zhǔn)備 在最適宜的培養(yǎng)條件下將細(xì)胞培養(yǎng)至靜止期或成熟期,進(jìn)行純度檢查后(參見科技部自然科技資源平臺(tái)聯(lián)合管理辦公室文件《微生物菌種純度檢測(cè)技術(shù)規(guī)程》(試行)),與保護(hù)劑混合均勻,分裝。微生物培養(yǎng)物濃度以細(xì)胞或孢子不少于108-1010個(gè)/ml為宜(以大腸桿菌為例,為了取得每毫升1010個(gè)活細(xì)胞菌液2毫升-2.5毫升,只需10毫升瓊脂斜面兩支)。采用較長(zhǎng)的毛細(xì)滴管,直接滴入安瓿管底部,注意不要濺污上部管壁,每管分裝量約0.1-0.2毫升,若是球形安瓿管,裝量為半個(gè)球部。若是液體培養(yǎng)的微生物,應(yīng)離心去除培養(yǎng)基,然后將培養(yǎng)物與保護(hù)劑混勻,再分裝于安瓿管中。分裝安瓿管時(shí)間盡量要短,最好在1-2小時(shí)內(nèi)分裝完畢并預(yù)凍。分裝時(shí)應(yīng)注意在無菌條件下操作。 4 預(yù)凍 一般預(yù)凍2小時(shí)以上,溫度達(dá)到-20℃到-35℃左右。 5 冷凍干燥 采用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥。 將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機(jī)的干燥箱內(nèi),開始冷凍干燥,時(shí)間一般為8-20小時(shí)。 6 真空封口及真空檢驗(yàn) 將安瓿管頸部用強(qiáng)火焰拉細(xì),然后采用真空泵抽真空,在真空條件下將安瓿管頸部加熱熔封。 熔封后的干燥管可采用高頻電火花真空測(cè)定儀測(cè)定真空度。 7 保藏 安瓿管應(yīng)低溫避光保藏。 8 質(zhì)量檢查 冷凍干燥后抽取若干支安瓿管進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)檢查,如存活率、生產(chǎn)能力、形態(tài)變異、雜菌污染等。 厭氧菌冷凍干燥管的制備 主要程序與需氧菌操作相同,注意保護(hù)劑的選擇和準(zhǔn)備,保護(hù)劑使用前應(yīng)在100℃的沸水中煮沸15分鐘左右,脫氣后放入冷水中急冷,除掉保護(hù)劑中的溶解氧。 復(fù)蘇方法 —— 先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部, —— 將安瓿管頂部燒熱, —— 用無菌棉簽沾冷水,在頂部擦一圈,頂部出現(xiàn)裂紋,用挫刀或鑷子頸部輕叩一下,敲下已開裂的安瓿管的頂端, —— 用無菌水或培養(yǎng)液溶解菌塊,使用無菌吸管移入新鮮培養(yǎng)基上,進(jìn)行適溫培養(yǎng)。 |
金蟲 (文壇精英)
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冷凍干燥工藝 藥物制品在冷凍之前的處理同水溶性注射液,然后采用無菌操作法將藥液分裝在注射容器內(nèi),送入冷凍干燥機(jī)的干燥箱中進(jìn)行凍結(jié),升華、干燥。由于制品升華必須在固體狀態(tài)進(jìn)行,因此預(yù)凍是冷凍干燥的重要環(huán)節(jié)。預(yù)凍溫度一般是指產(chǎn)品在升華前必須達(dá)到的溫度。如不經(jīng)過預(yù)凍而直接抽真空,易產(chǎn)生類似“沸騰”現(xiàn)象。如果制品在“沸騰”中凍結(jié),部分制品可能冒出瓶外,造成藥液損失或使制品凹凸不平。預(yù)凍方法有速凍法和慢凍法兩種。醫(yī)學(xué)教育`網(wǎng)搜集整理前法是在制品進(jìn)箱前,先將干燥箱溫度降至-40℃到-45℃,再將制品送入箱內(nèi),以造成較大溫度差,從而使致冷作用迅速,制品急速冷卻。后法系每分鐘降溫1℃,形成的晶粒肉眼可見。 不同制品對(duì)凍結(jié)程度要求不同,升華干燥的操作也不相同,常用有兩種,一種是一次升華法,另一種為反復(fù)預(yù)凍升華法。前法系指制品一次凍結(jié),一次升華即可完成干燥的方法,適用于共熔點(diǎn)在-10℃到-20℃的制品,結(jié)構(gòu)單一、粘度和濃度均不大,裝量厚度在10-15mm.后法適用于蜂蜜、王漿等結(jié)構(gòu)復(fù)雜、粘稠的產(chǎn)品,它們?cè)谏A過程中往往雜塊軟化,產(chǎn)生氣泡,使制品表面形成粘稠狀的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),為了保證制品達(dá)到干燥,可將共熔點(diǎn)為-25℃的制品速凍至-45℃,然后升溫至共熔點(diǎn)附近,維持30-40分鐘,再降溫至-40℃,如此反復(fù)處理,直到制品中水分不能使制品再溶為液態(tài)。待制品水分已基本被蒸發(fā),且溫度已回升到0℃以上,為盡可能除去殘余的水,需要進(jìn)行真空干燥,干燥的溫度應(yīng)根據(jù)制品性質(zhì)確定。 |






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