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[交流]
從微生物生理而言，可否可以讓凍干菌粉在常溫下保存
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凍干菌粉休眠的原理是什么？ 有沒有可能讓凍干菌粉在常溫下繼續(xù)保持休眠狀態(tài)或者低代謝的狀態(tài)？（繼續(xù)控制菌粉濕度以及厭氧環(huán)境的話，唯一的變量就是溫度從-80度到25度。) 如果非要讓細菌在常溫下保存更長時間，從細菌的生理角度來講，有什么思路可以借鑒的呢？ 因為對微生物不太了解，希望大家不吝賜教，最好推薦相關(guān)的書籍， 能提供電子版的就更是感激不盡啦�。�！ |
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2樓2012-04-25 00:59:55
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9樓2012-04-25 09:14:21
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普弟(金幣+1): 謝謝參與
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10樓2012-04-25 09:20:54
11樓2012-04-25 09:53:39
12樓2012-04-25 14:21:48
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21樓2012-04-25 19:59:47
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真空冷凍干燥法將微生物冷凍，在減壓下利用升華作用除去水分，使細胞的生理活動趨于停止，從而長期維持存活狀態(tài)。 操作步驟如下： 好氧菌冷凍干燥管的制備 1 安瓿管準備 安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安瓿管時，先用2%鹽酸浸泡過夜，自來水沖洗干凈后，用蒸餾水浸泡至pH中性，干燥后、貼上標簽，標上菌號及時間，加入脫脂棉塞后，121℃下高壓滅菌15-20分鐘，備用。 2 保護劑的選擇和準備 保護劑種類要根據(jù)微生物類別選擇。配制保護劑時，應(yīng)注意其濃度及pH值，以及滅菌方法。如血清，可用過濾滅菌；牛奶要先脫脂，用離心方法去除上層油脂，一般在100℃間歇煮沸2-3次，每次10-30分鐘，備用。 3 凍干樣品的準備 在最適宜的培養(yǎng)條件下將細胞培養(yǎng)至靜止期或成熟期，進行純度檢查后（參見科技部自然科技資源平臺聯(lián)合管理辦公室文件《微生物菌種純度檢測技術(shù)規(guī)程》（試行）），與保護劑混合均勻，分裝。微生物培養(yǎng)物濃度以細胞或孢子不少于108-1010個/ml為宜（以大腸桿菌為例，為了取得每毫升1010個活細胞菌液2毫升-2.5毫升，只需10毫升瓊脂斜面兩支）。采用較長的毛細滴管，直接滴入安瓿管底部，注意不要濺污上部管壁，每管分裝量約0.1-0.2毫升，若是球形安瓿管，裝量為半個球部。若是液體培養(yǎng)的微生物，應(yīng)離心去除培養(yǎng)基，然后將培養(yǎng)物與保護劑混勻，再分裝于安瓿管中。分裝安瓿管時間盡量要短，最好在1-2小時內(nèi)分裝完畢并預凍。分裝時應(yīng)注意在無菌條件下操作。 4 預凍 一般預凍2小時以上，溫度達到-20℃到-35℃左右。 5 冷凍干燥 采用冷凍干燥機進行冷凍干燥。 將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機的干燥箱內(nèi)，開始冷凍干燥，時間一般為8-20小時。 6 真空封口及真空檢驗 將安瓿管頸部用強火焰拉細，然后采用真空泵抽真空，在真空條件下將安瓿管頸部加熱熔封。 熔封后的干燥管可采用高頻電火花真空測定儀測定真空度。 7 保藏 安瓿管應(yīng)低溫避光保藏。 8 質(zhì)量檢查 冷凍干燥后抽取若干支安瓿管進行各項指標檢查，如存活率、生產(chǎn)能力、形態(tài)變異、雜菌污染等。 厭氧菌冷凍干燥管的制備 主要程序與需氧菌操作相同，注意保護劑的選擇和準備，保護劑使用前應(yīng)在100℃的沸水中煮沸15分鐘左右，脫氣后放入冷水中急冷，除掉保護劑中的溶解氧。 復蘇方法 —— 先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部， —— 將安瓿管頂部燒熱， —— 用無菌棉簽沾冷水，在頂部擦一圈，頂部出現(xiàn)裂紋，用挫刀或鑷子頸部輕叩一下，敲下已開裂的安瓿管的頂端， —— 用無菌水或培養(yǎng)液溶解菌塊，使用無菌吸管移入新鮮培養(yǎng)基上，進行適溫培養(yǎng)。 |
22樓2012-04-25 20:04:40
24樓2012-04-25 20:33:39
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普弟(金幣+1): 謝謝參與
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冷凍干燥工藝 藥物制品在冷凍之前的處理同水溶性注射液，然后采用無菌操作法將藥液分裝在注射容器內(nèi)，送入冷凍干燥機的干燥箱中進行凍結(jié)，升華、干燥。由于制品升華必須在固體狀態(tài)進行，因此預凍是冷凍干燥的重要環(huán)節(jié)。預凍溫度一般是指產(chǎn)品在升華前必須達到的溫度。如不經(jīng)過預凍而直接抽真空，易產(chǎn)生類似“沸騰”現(xiàn)象。如果制品在“沸騰”中凍結(jié)，部分制品可能冒出瓶外，造成藥液損失或使制品凹凸不平。預凍方法有速凍法和慢凍法兩種。醫(yī)學教育`網(wǎng)搜集整理前法是在制品進箱前，先將干燥箱溫度降至-40℃到-45℃，再將制品送入箱內(nèi)，以造成較大溫度差，從而使致冷作用迅速，制品急速冷卻。后法系每分鐘降溫1℃，形成的晶粒肉眼可見。 不同制品對凍結(jié)程度要求不同，升華干燥的操作也不相同，常用有兩種，一種是一次升華法，另一種為反復預凍升華法。前法系指制品一次凍結(jié)，一次升華即可完成干燥的方法，適用于共熔點在-10℃到-20℃的制品，結(jié)構(gòu)單一、粘度和濃度均不大，裝量厚度在10-15mm.后法適用于蜂蜜、王漿等結(jié)構(gòu)復雜、粘稠的產(chǎn)品，它們在升華過程中往往雜塊軟化，產(chǎn)生氣泡，使制品表面形成粘稠狀的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，為了保證制品達到干燥，可將共熔點為-25℃的制品速凍至-45℃，然后升溫至共熔點附近，維持30-40分鐘，再降溫至-40℃，如此反復處理，直到制品中水分不能使制品再溶為液態(tài)。待制品水分已基本被蒸發(fā)，且溫度已回升到0℃以上，為盡可能除去殘余的水，需要進行真空干燥，干燥的溫度應(yīng)根據(jù)制品性質(zhì)確定。 |
25樓2012-04-25 20:43:59
27樓2012-04-26 10:38:21
28樓2012-04-26 13:54:35
簡單回復
2012-04-25 02:08
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普弟(金幣+1): 謝謝參與
2012-04-25 06:51
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2012-04-25 07:51
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tangbohejin18樓
2012-04-25 19:43
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奮力拼搏23樓
2012-04-25 20:15
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zhangyingh26樓
2012-04-26 10:23
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