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七八月的陽光銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于de novo拼接結(jié)果的疑問
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之前發(fā)帖問過關(guān)于trinity軟件de novo拼接的問題,但始終有些疑惑得不到解答。 (上一個(gè)帖子的問題: 最近在公司做了轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,植物樣本,illumina Hiseq2000,三個(gè)樣本共100M的clean reads,一起拼接。該公司用Trinity軟件進(jìn)行de novo拼接,拼出來contigs達(dá)40多萬條,后來又用CD-HIT進(jìn)行聚類,結(jié)果仍有30多萬條,其中包含很多轉(zhuǎn)錄本的存在。從文獻(xiàn)中看一般植物轉(zhuǎn)錄組de novo拼接也就幾萬條序列,太多的轉(zhuǎn)錄本會(huì)影響到后面表達(dá)量的比較。不知道是由于Trinity這個(gè)拼接軟件的原因還是其他什么原因。) 后來從拼接的contig中挑了些序列出來仔細(xì)比對(duì),發(fā)現(xiàn)了一些問題。在trinity軟件輸出的結(jié)果中,同一個(gè)comp里面包含了很多的seq(每一個(gè)seq就是一個(gè)contig),很多的seq間有重疊的序列,多個(gè)seq可以拼接成一條長的序列,并且這條序列能很好的比對(duì)到擬南芥基因上。 我很疑惑為什么trinity軟件不把這些短的seq組裝成一條長的序列,按照我的理解能組裝成一條長序列應(yīng)該更有利于分析。不然,做差異表達(dá)分析的時(shí)候看起來是多個(gè)基因都差異表達(dá)了,其實(shí)這多個(gè)基因都只是一個(gè)基因上的不同片段而已。我看SOAP的原理,好像就可以將contig組裝成scaffold。 不知用過de novo拼接軟件的各位能否給些意見和建議。 |
銅蟲 (初入文壇)
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