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lantian_2011銀蟲 (初入文壇)
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建立完善的耐藥金黃色葡萄球菌細菌生物膜模型方法;對中藥材大黃提取分離純化,同時對大黃中分離得到的部分化合物進行對細菌及細菌生物膜作用的活性研究?疾炀哂锌咕饔玫闹兴巻误w化合物大黃蒽醌類化合物對耐藥細菌生物膜的作用;篩選出對耐藥細菌生物膜具有較強抑制作用的中藥活性單體,并考察其與大黃蒽醌類單體化合物及Rb1聯(lián)合應用對細菌生物膜的影響。 通過96孔板進行微量培養(yǎng),采用SEM和CLSM觀察耐藥細菌生物膜的形成及形態(tài),建立耐藥金黃色葡萄球菌細菌生物膜模型;以耐藥金黃色葡萄球菌生物膜模型為藥物篩選模型;采用微量肉湯稀釋法篩選與大黃蒽醌單體及Rb1聯(lián)合用藥對細菌及生物膜產(chǎn)生有效作用的其他中藥單體;將大黃單體提取物、中藥單體化合物與細菌及細菌生物膜共同培養(yǎng),通過酶標儀測取OD值從而測定細菌及生物膜的生長能力,通過計算抑菌率和F值來觀察各樣品單獨及聯(lián)合用藥對細菌及生物膜抑制作用的大小。 通過酶標儀測定OD值及掃描電子顯微鏡(SEM)和激光共聚焦電子顯微鏡(CLSM)的鏡下觀察的結果,確定耐藥菌金黃色葡萄球菌在37℃培養(yǎng)24h時,形成生物膜;大黃蒽醌單體對正常金黃色葡萄球菌的抑制率最高達78.17%,大黃蒽醌單體對耐藥金黃色葡萄球菌的抑制率最高達62.62%;篩選出單體瑞香素、焦沒食子酸、硫酸氫小檗堿對金黃色葡萄球菌及BBF具有很強的抑制作用,焦沒食子酸對耐藥金黃色葡萄球菌的抑制率最高達71.78%,硫酸氫小檗堿對耐藥金黃色葡萄球菌的抑制率最高達72.14%,瑞香素對耐藥金黃色葡萄球菌的抑制率最高達73.22%;聯(lián)合用藥結果顯示:瑞香素、焦沒食子酸、硫酸氫小檗堿與大黃酸聯(lián)合應用,對正常和耐藥金黃色葡萄球菌及BBF產(chǎn)生一定協(xié)同抑制作用;人參皂苷Rb1與瑞香素聯(lián)合應用,對正常大腸桿菌及BBF產(chǎn)生一定協(xié)同抑制作用。 結論:通過掃描電子顯微鏡(SEM)和激光共聚焦電子顯微鏡(CLSM)實驗,建立了耐藥細菌生物膜模型;通過中藥單體化合物對BBF的作用,進一步驗證了微量法作為篩選治療慢性感染性疾病藥物模型的可行性。篩選出對細菌及BBF具有較強抑制作用的大黃蒽醌單體,并與瑞香素、焦沒食子酸、硫酸氫小檗堿聯(lián)合應用對正常和耐藥金黃色葡萄球菌及BBF產(chǎn)生一定的協(xié)同抑制作用,這為尋找聯(lián)合用藥代替抗生素藥物,治療慢性感染性疾病的深入開發(fā)研究,提供科學的依據(jù),為后續(xù)研究打下良好的基礎。 |
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