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[求助]
PCR體系放大后無(wú)目的片段
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昨天剛做了PCR克隆GFP基因的啟動(dòng)子，引物是自己設(shè)計(jì)的，10微升體系如下： 10*Buffer 1 MgCl2 1 dNTPs 0.2 L 0.2 R 0.2 Taq 1（實(shí)驗(yàn)室自己提取） ddH2O 5.9 DNA 0.5（質(zhì)粒DNA稀釋1000倍） 上面的體系，可以擴(kuò)增出目的片段，擴(kuò)大體系至60微升之后，得不到任何產(chǎn)物，不知道問(wèn)題會(huì)出在什么地方，請(qǐng)賜教。 |
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9樓2012-05-23 00:40:42
wushuwei1104
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-05-04 13:59:24
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-05-04 13:59:24
我們之前也做過(guò)這種實(shí)驗(yàn)，也遇到過(guò)這種情況。按常理說(shuō)，這種情況不應(yīng)該出現(xiàn)，但是具體分析原因的話，可能是小體系中某些物質(zhì)濃度和你坐大體系時(shí)濃度不一樣（可能是用槍吸的時(shí)候出現(xiàn)了差異），所以一般而言我們體系都不敢變化，原來(lái)做什么體系做出來(lái)了，今后也按這個(gè)體系做。要是更改體系的話，可能還要重新摸索條件！ 呵呵，僅是個(gè)人觀點(diǎn)，僅供參考��！ 祝君好運(yùn)！ |
2樓2012-05-04 12:34:43
karin
木蟲(chóng) (小有名氣)
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3樓2012-05-04 12:40:03
4樓2012-05-05 01:12:17
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