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shui__lian新蟲 (初入文壇)
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[求助]
黃精多糖含量出奇高 怎么回事
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大家好 我現(xiàn)在用藥典方法 提取多糖 測黃精中多糖含量 即取60度干燥恒重的生黃精粉末0.25g,精密稱定,置圓底燒瓶中,加80%乙醇150ml回流提取1h,趁熱濾過,殘渣用80%乙醇洗滌3次,每次10ml,將殘渣及濾紙置燒瓶中,加水150ml,加熱回流1h,趁熱濾過,殘渣及燒瓶用水洗滌4次,每次10ml,合并濾液與洗液,放冷,轉(zhuǎn)移至250ml容量瓶中,加水至刻度,搖勻 精密吸取1ml至10ml具塞干燥試管中,加水至2ml,搖勻,在冰水浴中緩慢滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液,至刻度,混勻,放冷后至水浴用保溫10min,取出,立即置冰水浴中冷卻10min,取出,以相應(yīng)試劑為空白,照紫外可見分光光度計在582nm波長處測定吸光度。 我分別按上述方法提了6次樣品,測得多糖含量 68% 左右。 實在搞不懂到底哪里出了問題,使測出的多糖含量這么高。。。 在做含量測定時,分別吸取1ml多糖液、1ml水和8ml0.2%蒽酮硫酸溶液時 都是用吸量管吸取的 這樣重復(fù)性比較好 但是就是含量出奇的高 哪位高手指點(diǎn)一下 謝啦 |
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1.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 將l000µg/mL稀釋為l00µg/mL。 取7支大試管,按下表數(shù)據(jù)配制一系列不同濃度的葡萄糖溶液: 管號 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液(mL) 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸餾水(mL) 1 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0 葡萄糖含量(µg) 0 10 20 40 60 80 100 在每支試管中立即加入蒽酮試劑5.0mL,(迅速浸于冰水浴中冷卻,)各管加完后一起浸于沸水浴中,管口加蓋,以防蒸發(fā)。自水浴沸騰起計時,準(zhǔn)確煮沸l(wèi)0 min,取出,用冰浴冷卻至室溫,在620 nm波長下以第一管為空白,迅速測其余各管吸光值。以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖含量(µg/ml)為橫坐標(biāo),以吸光值為縱坐標(biāo),繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。(EXCEL作圖) |

| 這是蒽酮硫酸法的標(biāo)準(zhǔn)方法,與你的方法有一定差距,波長選定,最好是自己進(jìn)行全波長掃描確定最優(yōu)的;其次樣品0.25g太少了,如果原料不算很貴的話,可以適當(dāng)加大量;樣品測定時,吸光值應(yīng)該在你的標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi),偏高偏低都不準(zhǔn)確;再者,不知黃精總糖含量是多少,有可能你得到的結(jié)果是總糖,標(biāo)準(zhǔn)方法不一定適合每個原料,建議將多糖醇沉一下,復(fù)溶再測定,進(jìn)行比較一下... |

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