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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » PCR
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[交流]
PCR 已有5人參與
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我今天做PCR時做了一個陰性對照（就是沒有加模板）但是確有引物二聚體的帶，還有目的基因的帶（不過不是太亮，就有一點），這是什么原因造成的？求各位蟲友幫忙分析下 [ 發(fā)自手機版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
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2樓2012-05-08 22:59:04
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出現(xiàn)的PCR擴增條帶與目的靶序列條帶一致，有時其條帶更整齊，亮度更高。可能原因如下： 引物設計不合適：選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性，因而在進行PCR擴增時，擴增出的PCR產(chǎn)物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出現(xiàn)假陽性。需重新設計引物。 靶序列或擴增產(chǎn)物的交叉污染：這種污染有兩種原因：一是整個基因組或大片段的交叉污染，導致假陽性。這種假陽性可用以下方法解決：①操作時應小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或濺出離心管外。②除酶及不能耐高溫的物質外，所有試劑或 器材均應高壓消毒。所用離心管及樣進槍頭等均應一次性使用。③必要時，在加標本前，反應管和試劑用紫外線照射，以破壞存在的核酸。二是空氣中的小片段核酸污染，這些小片段比靶序列短，但有一定的同源性�？苫ハ嗥唇�，與引物互補后，可擴增出PCR產(chǎn)物，而導致假陽性的產(chǎn)生，可用巢式PCR方法來減輕或消除。 |
3樓2012-05-08 23:23:30
atlanticwi
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4樓2012-05-08 23:34:44
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7樓2012-05-09 12:15:33
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8樓2012-05-09 14:59:31
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