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hucuiyao新蟲 (小有名氣)
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[交流]
菌液PCR問題 已有10人參與
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| 我做菌液PCR，同學(xué)說出來的都是引物二聚體，這是怎么回事呢？ |
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超然渡陳
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
西瓜: 金幣+3, 鼓勵交流 2012-05-09 19:11:47
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
西瓜: 金幣+3, 鼓勵交流 2012-05-09 19:11:47
| 樓主應(yīng)該是用菌液PCR做快速鑒定轉(zhuǎn)化后的陽性克隆吧？所用的引物是你之前克隆基因的引物，還是載體上的通用引物？要把具體情況說清楚而且最好要帶圖的。假如用的是克隆基因時的引物，做菌落PCR或者菌液PCR沒有目的條帶而出現(xiàn)引物二聚體可以大概說明是假陽性。要是用的通用引物或者其它新的引物，可能是你退火溫度沒選好或者其它一些原因，但是不能肯定是假陽性。另外需要說明的是做酵母菌落或者菌液PCR要提前煮沸，因?yàn)榻湍赣屑?xì)胞壁，預(yù)變性和變性不能使壁完全破碎，而一般的細(xì)菌就不用預(yù)先煮沸。 |
5樓2012-05-09 17:10:37
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6樓2012-05-10 15:59:54
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