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固相多肽合成中的cleavage和沉淀多肽問題
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固相多肽合成中交聯(lián)樹脂的步驟已經(jīng)搞定了 只是wang樹脂的切割和沉淀不知道怎么搞 我做的肽鏈有13個(gè)長度 fmoc保護(hù)已經(jīng)脫掉了 側(cè)鏈上的保護(hù)基有tBu和Trt 樹脂的切割溶劑沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn) 恩 我自己用的是TFA 水 苯酚 茴香硫醚 EDT（1,2-乙二硫醇）配置的 可EDT的味道特別的大 扛不住 切割樹脂后的濾液加到乙醚中也沒有明顯的沉淀 只是有乳濁狀的 抽濾之后沒有拿到沉淀 之后離心拿到的產(chǎn)物是黃色油狀的 感覺有問題 恩 求做過多肽固相合成的大俠指導(dǎo) 不勝感激！��！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
lvziyu: 金幣+3, ★★★很有幫助 2012-05-11 09:46:45
lvziyu: 回帖置頂 2012-05-25 09:48:41
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我感覺是你的切割溶劑出了問題，常用的切割溶劑有兩種：Reagent B（TFA/苯酚/水/Tis=88.5：5：5：2.5）和Reagent K（TFA/苯酚/苯甲硫醚/水/EDT=82.5：5：5：5：2.5）。估計(jì)你想用的是Reagent K，那還是需要按比例配制的，切割的反應(yīng)時(shí)間為2~2.5h，之后的濾液加到10倍體積以上的冰乙醚中，振搖均勻，冰浴中靜止約30min，離心收集沉淀（注意：不能過濾，否則會(huì)因多肽的粘附而損失很多產(chǎn)物）。 因?yàn)槭褂肦eagent K，側(cè)鏈上的tBu和Trt 都應(yīng)該被脫除，得到的應(yīng)該是沒有保護(hù)的多肽。還有切割溶劑的量大約為1g樹脂用1mL切割試劑就足夠，用多了反而會(huì)造成不易獲得沉淀。 |
2樓2012-05-11 08:58:08
3樓2012-05-11 09:52:56
4樓2012-05-11 10:01:06
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