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shaoxin816銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
【求助】藻類protein的測定
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| 本人要測定螺旋藻中protein的含量,打算用SDS-PAGE或者Lowry法~問題來了,測定之前需要那些預(yù)處理?剛剛接觸~不懂不懂。 |
銀蟲 (正式寫手)
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2 細(xì)胞蛋白含量的測定 蛋白質(zhì)測定采用考馬氏亮藍(lán)染色法,以牛血清清蛋白做標(biāo)準(zhǔn)物。 (1) 考馬斯亮藍(lán)G-250溶液的配制 準(zhǔn)確稱取100mg考馬斯亮藍(lán)G-250,溶于50mL95%乙醇中,加入85%磷酸100mL,用蒸餾水定容到lL,濾紙過濾后,保存于棕色瓶中。 (2) 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制(100 ug/mL) 采用5mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)牛血清白蛋白溶液,加蒸餾水溶解并定容,配制成100ug/ml。 (3) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 從100 ug/ml的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液中分別準(zhǔn)確吸取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL于10ml試管中,并加入相應(yīng)量的蒸餾水至1ml后加入5.0 mL考馬斯亮藍(lán)溶液充分混合,放置至少2 min,用l cm光徑比色皿在595nm下測得溶液吸光度。以蛋白質(zhì)濃度(C)為橫坐標(biāo),以吸光度(A)為縱坐標(biāo),得出標(biāo)準(zhǔn)曲線為A=0.0081C+0.0024,R2=0.9978。 (4) 蛋白質(zhì)含量的測定 準(zhǔn)確吸取藻液5 mL,5000 r/min轉(zhuǎn)速下離心10 min后,倒掉上清液,加入同等量0.1M的PBS。超聲波破碎儀選擇功率30%,Pause On 3 s, Pause Off 1s,冰浴。破碎完全后,5000 r/min轉(zhuǎn)速下離心10min,取1 mL上清液,加入5mL考馬斯亮藍(lán)溶液,用1 mLPBS和5mL考馬斯亮藍(lán)混合溶液作對照,在595 nm波長下用紫外分光光度計測其吸光度值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線換算蛋白質(zhì)的含量。 |
銀蟲 (正式寫手)
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