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shaoxin816銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
【求助】藻類protein的測(cè)定
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| 本人要測(cè)定螺旋藻中protein的含量，打算用SDS-PAGE或者Lowry法~問(wèn)題來(lái)了，測(cè)定之前需要那些預(yù)處理？剛剛接觸~不懂不懂。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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shaoxin816: 金幣+5, ★★★★★最佳答案, 謝謝啦~~ 2012-05-14 19:56:59
shaoxin816: 金幣+5, ★★★★★最佳答案, 謝謝啦~~ 2012-05-14 19:56:59
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2 細(xì)胞蛋白含量的測(cè)定 蛋白質(zhì)測(cè)定采用考馬氏亮藍(lán)染色法，以牛血清清蛋白做標(biāo)準(zhǔn)物。 (1) 考馬斯亮藍(lán)G-250溶液的配制 準(zhǔn)確稱取100mg考馬斯亮藍(lán)G-250，溶于50mL95％乙醇中，加入85％磷酸100mL，用蒸餾水定容到lL，濾紙過(guò)濾后，保存于棕色瓶中。 (2) 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制(100 ug／mL) 采用5mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)牛血清白蛋白溶液，加蒸餾水溶解并定容，配制成100ug/ml。 (3) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 從100 ug/ml的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液中分別準(zhǔn)確吸取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL于10ml試管中，并加入相應(yīng)量的蒸餾水至1ml后加入5.0 mL考馬斯亮藍(lán)溶液充分混合，放置至少2 min，用l cm光徑比色皿在595nm下測(cè)得溶液吸光度。以蛋白質(zhì)濃度(C)為橫坐標(biāo)，以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線為A=0.0081C+0.0024，R2=0.9978。 (4) 蛋白質(zhì)含量的測(cè)定 準(zhǔn)確吸取藻液5 mL，5000 r／min轉(zhuǎn)速下離心10 min后，倒掉上清液，加入同等量0.1M的PBS。超聲波破碎儀選擇功率30%，Pause On 3 s, Pause Off 1s,冰浴。破碎完全后，5000 r／min轉(zhuǎn)速下離心10min，取1 mL上清液，加入5mL考馬斯亮藍(lán)溶液，用1 mLPBS和5mL考馬斯亮藍(lán)混合溶液作對(duì)照，在595 nm波長(zhǎng)下用紫外分光光度計(jì)測(cè)其吸光度值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線換算蛋白質(zhì)的含量。 |
4樓2012-05-14 18:35:14
2樓2012-05-11 23:02:50
shaoxin816
銀蟲 (正式寫手)
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- 專業(yè): 細(xì)胞周期與調(diào)控
3樓2012-05-14 16:46:36
shaoxin816
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6樓2012-05-16 10:51:19
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