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[求助]
請(qǐng)教RT-PCR 擴(kuò)增問(wèn)題
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用的Takara DR050s PCR擴(kuò)怎程序大致為： 98℃——5min ························· 98℃——10 55℃——15s ×30循環(huán) 68℃——3min ························· · 68℃——5min 引物TM 為 66.1 和64.8 擴(kuò)不出來(lái)?xiàng)l帶怎么優(yōu)化 |
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gywyl1977
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
luckking: 金幣+2 2012-05-13 14:34:07
amisking: 回帖置頂 2012-05-13 17:34:40
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amisking: 回帖置頂 2012-05-13 17:34:40
| 做RT-PCR哪有用這么長(zhǎng)的片段，擴(kuò)增效率會(huì)很低。一般也就100-200bp。這么長(zhǎng)的片斷，P出來(lái)也不能說(shuō)明問(wèn)題。還有，循環(huán)數(shù)是要摸索的，太多的話就到了PCR的平臺(tái)期，根本就看不出差別了，我們做細(xì)菌時(shí)循環(huán)數(shù)都在20個(gè)循環(huán)左右。 |
4樓2012-05-13 12:19:30
3樓2012-05-13 11:18:51
西瓜
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luckking5樓2012-05-13 14:40:52
6樓2012-05-13 14:47:59
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