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maaotao銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
細(xì)胞融合時候第一次克隆化生長的細(xì)胞為什么不能保證是單克隆化？
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| 如題，為什么為獲得穩(wěn)定的單克隆細(xì)胞株需經(jīng)2～3次的再克隆才成，第一次篩選后保證每個孔中只有一個細(xì)胞，這樣再生長以后不就是單克隆細(xì)胞了嗎？？ |
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3樓2012-05-14 20:26:23
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
maaotao: 金幣+20, ★★★★★最佳答案 2012-05-15 12:05:32
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融合后的細(xì)胞在孔里生長時，一般并不是一個單純的克�。ㄒ话闶莾蓚�或者多個克隆，就算肉眼看到的是形成一個完整的克隆，但事實上可能是由兩個或者多個原始的雜交瘤形成的），如果直接將其擴(kuò)大培養(yǎng)將會產(chǎn)生兩個問題：一是如果有兩個或兩個以上的克隆或一個克隆實際上是由兩個克隆長在一起形成的，并且都分泌抗體，那么就有可能產(chǎn)生針對不同表位的抗體，這樣最終得到的抗體不是單克隆抗體，而是“二克隆抗體”或“多個克隆產(chǎn)的抗體”；另一個問題是如果克隆中包括不能分泌抗體的雜交瘤，那么不能分泌抗體的雜交瘤因為增殖速度更快，最終將成為優(yōu)勢生長細(xì)胞，導(dǎo)致目標(biāo)雜交瘤無法分離甚至完全消失。所以，細(xì)胞融合后，一旦鑒定可以產(chǎn)生目標(biāo)抗體，就應(yīng)立即進(jìn)行克隆化，確保能分離出單個細(xì)胞重新形成克隆。 通常 融合孔的細(xì)胞雖然陽性，但由于剛?cè)诤虾蠹?xì)胞容易缺失染色體，故分泌抗體不穩(wěn)定，一般要經(jīng)過2-3次亞克隆。通常，亞克隆為有限稀釋，該方法需稀釋到0.5個每孔時單克隆的孔數(shù)最多。這個是由泊松分布定律計算而來的，具體的上網(wǎng)查下原理吧。 |
4樓2012-05-15 11:10:59
5樓2015-04-10 12:55:08
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