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maaotao銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
細(xì)胞融合時(shí)候第一次克隆化生長(zhǎng)的細(xì)胞為什么不能保證是單克隆化？
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| 如題，為什么為獲得穩(wěn)定的單克隆細(xì)胞株需經(jīng)2～3次的再克隆才成，第一次篩選后保證每個(gè)孔中只有一個(gè)細(xì)胞，這樣再生長(zhǎng)以后不就是單克隆細(xì)胞了嗎？？ |
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5樓2015-04-10 12:55:08
2樓2012-05-14 14:51:49
wen1023tao
銅蟲 (小有名氣)
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3樓2012-05-14 20:26:23
longqingci
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
maaotao: 金幣+20, ★★★★★最佳答案 2012-05-15 12:05:32
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融合后的細(xì)胞在孔里生長(zhǎng)時(shí)，一般并不是一個(gè)單純的克�。ㄒ话闶莾蓚�(gè)或者多個(gè)克隆，就算肉眼看到的是形成一個(gè)完整的克隆，但事實(shí)上可能是由兩個(gè)或者多個(gè)原始的雜交瘤形成的），如果直接將其擴(kuò)大培養(yǎng)將會(huì)產(chǎn)生兩個(gè)問題：一是如果有兩個(gè)或兩個(gè)以上的克隆或一個(gè)克隆實(shí)際上是由兩個(gè)克隆長(zhǎng)在一起形成的，并且都分泌抗體，那么就有可能產(chǎn)生針對(duì)不同表位的抗體，這樣最終得到的抗體不是單克隆抗體，而是“二克隆抗體”或“多個(gè)克隆產(chǎn)的抗體”；另一個(gè)問題是如果克隆中包括不能分泌抗體的雜交瘤，那么不能分泌抗體的雜交瘤因?yàn)樵鲋乘俣雀�，最終將成為優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng)細(xì)胞，導(dǎo)致目標(biāo)雜交瘤無法分離甚至完全消失。所以，細(xì)胞融合后，一旦鑒定可以產(chǎn)生目標(biāo)抗體，就應(yīng)立即進(jìn)行克隆化，確保能分離出單個(gè)細(xì)胞重新形成克隆。 通常 融合孔的細(xì)胞雖然陽(yáng)性，但由于剛?cè)诤虾蠹?xì)胞容易缺失染色體，故分泌抗體不穩(wěn)定，一般要經(jīng)過2-3次亞克隆。通常，亞克隆為有限稀釋，該方法需稀釋到0.5個(gè)每孔時(shí)單克隆的孔數(shù)最多。這個(gè)是由泊松分布定律計(jì)算而來的，具體的上網(wǎng)查下原理吧。 |
4樓2012-05-15 11:10:59
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