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[求助]
RNA電泳
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各位高手大家好，新手在此請教幾個問題, 希望各位不吝賜教 請問我從細胞中提取出來的RNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄用于后續(xù)PCR，要確定它的完整性，除了測OD值還要進行電泳表征嗎？ 另外，測吸收時全部都要用DECP水嗎？一定要用甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳嗎，所有電泳時的溶液包括電泳緩沖夜、載樣液等都要用DECP水嗎，電泳槽要經(jīng)特殊處理嗎？ 我測RNAOD值時用普通二次水稀釋后，測其OD值為1.875，是不是說明只測吸收不能說明RNA的完整性？ 先謝謝大家！ |
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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵應(yīng)助，謝謝分享經(jīng)驗 2012-05-21 17:22:34
821078607: 金幣+4, ★有幫助, 謝謝~~ 2012-05-21 22:23:42
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821078607: 金幣+4, ★有幫助, 謝謝~~ 2012-05-21 22:23:42
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呵呵，我也是個新手，特別是對于細胞核酸的提取來說。我提植物組織的核酸較多。在此說一下我的感受。 1.RNA提取出來要驗證其完整性，一般是通過測OD和跑電泳結(jié)合來看，OD260/OD280在1.6-2.0都可以，跑膠的話跑個普通的瓊脂糖凝膠就可以了，主要是28s和18s的亮度，5s一般不能太亮，否則大都是降解了 2.測OD時稀釋和空白最好用你溶RNA的液體，這樣測得的結(jié)果才比較準(zhǔn)確。電泳時電泳緩沖液和載樣液其實也不用DEPC,不過最好換新鮮的電泳液。電泳槽拿純凈水沖沖就可以。跑膠過程比較快，RNA在此過程中也沒么快降解。 3.只測OD260不能說明其完整性，但可以計算其濃度。 以上是個人實驗的感受和經(jīng)驗，如有不對的地方還請指教，希望對你有所幫助！ |
3樓2012-05-21 01:17:31
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2樓2012-05-20 17:16:20
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