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[求助]
RNA電泳
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各位高手大家好，新手在此請(qǐng)教幾個(gè)問(wèn)題, 希望各位不吝賜教 請(qǐng)問(wèn)我從細(xì)胞中提取出來(lái)的RNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄用于后續(xù)PCR，要確定它的完整性，除了測(cè)OD值還要進(jìn)行電泳表征嗎？ 另外，測(cè)吸收時(shí)全部都要用DECP水嗎？一定要用甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳嗎，所有電泳時(shí)的溶液包括電泳緩沖夜、載樣液等都要用DECP水嗎，電泳槽要經(jīng)特殊處理嗎？ 我測(cè)RNAOD值時(shí)用普通二次水稀釋后，測(cè)其OD值為1.875，是不是說(shuō)明只測(cè)吸收不能說(shuō)明RNA的完整性？ 先謝謝大家！ |
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呵呵，我也是個(gè)新手，特別是對(duì)于細(xì)胞核酸的提取來(lái)說(shuō)。我提植物組織的核酸較多。在此說(shuō)一下我的感受。 1.RNA提取出來(lái)要驗(yàn)證其完整性，一般是通過(guò)測(cè)OD和跑電泳結(jié)合來(lái)看，OD260/OD280在1.6-2.0都可以，跑膠的話跑個(gè)普通的瓊脂糖凝膠就可以了，主要是28s和18s的亮度，5s一般不能太亮，否則大都是降解了 2.測(cè)OD時(shí)稀釋和空白最好用你溶RNA的液體，這樣測(cè)得的結(jié)果才比較準(zhǔn)確。電泳時(shí)電泳緩沖液和載樣液其實(shí)也不用DEPC,不過(guò)最好換新鮮的電泳液。電泳槽拿純凈水沖沖就可以。跑膠過(guò)程比較快，RNA在此過(guò)程中也沒么快降解。 3.只測(cè)OD260不能說(shuō)明其完整性，但可以計(jì)算其濃度。 以上是個(gè)人實(shí)驗(yàn)的感受和經(jīng)驗(yàn)，如有不對(duì)的地方還請(qǐng)指教，希望對(duì)你有所幫助！ |
3樓2012-05-21 01:17:31
cheng_xiao
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2樓2012-05-20 17:16:20
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4樓2012-05-21 10:53:19
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821078607: 金幣+2, ★有幫助 2012-05-21 22:24:37
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百度一下提取RNA的操作或注意事項(xiàng)。 1、提取過(guò)程所用到的試劑或器皿均應(yīng)無(wú)RNase污染。具體的去RNase可百度，隨處可見。 2、溶解RNA肯定需要用DEPC水（0.1%DEPC處理過(guò)然后高壓滅菌，或直接購(gòu)買DEPC-Water（RNase-free））. 3、一般的實(shí)驗(yàn)要求測(cè)OD及跑電泳。測(cè)DOD |
5樓2012-05-21 11:09:46
6樓2012-05-21 11:11:30
7樓2012-05-22 09:15:56
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| 我提RNA摸索了近兩個(gè)月，現(xiàn)在算很順利了。其實(shí)只要提取的時(shí)候小心一點(diǎn)，跑電泳的時(shí)候同新配制的TBE做電泳液，150v泡20min就行了。跑電泳的時(shí)候可以買專用的RNAloading buffer。跑出來(lái)?xiàng)l帶會(huì)很好看。電泳條帶很好就不用測(cè)OD值了。電泳條帶上游明顯的基因組污染的話果斷重新提取，每次提取不要貪心，提4個(gè)樣品左右為宜，太多的話提的不好。 |
8樓2012-05-22 22:42:26
9樓2012-05-22 23:57:25
陳朵朵
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10樓2012-05-23 10:43:40
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