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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 關于兼并引物擴增
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中國藥人金蟲 (小有名氣)
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[求助]
關于兼并引物擴增
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各位大俠： 我最近在利用簡并引物做PCR擴增，設計了兩對簡并引物（都是根據(jù)保守區(qū)域設計的），一對上下游都是簡并引物（兼并度都為64）。另一對上游是兼并引物、下游是dT,利用Touchdown進行擴增，條件為95攝氏度預變性4min,95℃變性30sec，55℃開始每個循環(huán)減低0.5℃1min，72℃1min 20x，95℃變性30sec，45℃1min，72℃1min 10x,但是擴增出來的都是彌散的片段沒有很明顯的條帶。接下來我該如何提高反應的特異性？是不是利用簡并引物和dT都不容易做出來��？求解？急！ |
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