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[交流]
WB顯影結(jié)果分析
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| 我所做蛋白，說明書上說分子量為70KD。發(fā)表的文章上作出的分子量也不是很一致，有的在80KD，有的90KD，還有100KD，樣本都是大鼠的。師姐用細胞樣品做現(xiàn)出來的條帶在70-100KD間屬于正常范圍內(nèi)，我做是大鼠樣本，每次WB顯影出的條帶分子量都稍微小于70KD，與實際分子量有點不符，我跟師姐所用抗體濃度一樣，不知道所顯出來的條帶是不是我的目的條帶呢？ |
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9樓2012-05-25 09:57:12
凌波麗
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sunxiao1987: 金幣+1, 很有道理哈 2012-05-25 12:28:00
小丹木木: 金幣+3, 辛苦！ 2012-05-25 13:48:48
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| 不可能與膠濃度有關(guān)系就能夠達到80-100KD的分子量差異，一個氨基酸殘基才110D，差20KD的分子量的蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)肯定不同，一般不可能有如此大分子量的側(cè)鏈修飾。除非是糖蛋白，有可能糖分子的含量能夠到達30%，而在不同的提取過程中，很可能糖鏈的保留情況很不相同，或者在細胞中糖鏈就呈現(xiàn)極大的多樣性，因此無法認定那種糖蛋白質(zhì)是標準蛋白質(zhì)，如果不是糖蛋白，那么即使SDS-PAGE測定的蛋白質(zhì)的分子量達到80-100KD的分子量差異，這是SDS-PAGE測定該蛋白質(zhì)的線型分子量規(guī)律已經(jīng)被打破，也就是不能用電泳在測定分子量了，那么也就必須用質(zhì)譜重新測定分子量，質(zhì)譜測定同種蛋白質(zhì)不可能出現(xiàn)如此的差異。 |
11樓2012-05-25 10:23:38
13樓2012-05-25 17:12:27
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5樓2012-05-24 22:31:37
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6樓2012-05-24 23:20:15
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小丹木木: 金幣+2, 辛苦了哈 2012-05-25 13:47:32
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用肽譜分析也可以，如果兩者蛋白質(zhì)的主鏈相同，但是一者側(cè)鏈存在修飾，可以用肽譜分析方法大致知道修飾位點在一級結(jié)構(gòu)的哪段，這樣可以有針對性對該段序列進行精確測定，可以用質(zhì)譜分析，也可以用化學(xué)分析方法。具體實驗的Protocols，包括 eptide mapping,請見：T.E.Creighton edit, Protein structure-----A Practical Approach,Oxford University Press,1997. |
7樓2012-05-25 00:50:56
凌波麗
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西瓜: 金幣+2, 辛苦，很熱心哈 2012-05-25 19:08:57
西瓜: 金幣+2, 辛苦，很熱心哈 2012-05-25 19:08:57
| 用肽譜分析也可以，如果兩者蛋白質(zhì)的主鏈相同，但是一者側(cè)鏈存在修飾，可以用肽譜分析方法大致知道修飾位點在一級結(jié)構(gòu)的哪段，這樣可以有針對性對該段序列進行精確測定，可以用質(zhì)譜分析，也可以用化學(xué)分析方法。具體實驗的Protocols，包括Peptide mapping,請見：T.E.Creighton edit, Protein structure-----A Practical Approach,Oxford University Press,1997. |
8樓2012-05-25 00:51:33
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14樓2012-05-25 22:35:52
15樓2012-05-27 08:54:02
簡單回復(fù)
2012-05-24 15:07
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sunxiao1987(金幣+1): 謝謝參與
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