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ymma213新蟲 (初入文壇)
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[求助]
SSR標記帶型分析
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Sample Text 哪位專家?guī)兔Ψ治鲆幌拢喝绺郊䦂D中的SSR標記電泳譜帶存在什么問題？如何改進？ 上方的譜帶是特異性帶嗎？請不吝賜教。 |
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ymma213
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西瓜: 回帖置頂 2012-05-31 09:39:54
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首先謝謝您的關(guān)注。請您在幫我們分析一下原因： 我們用的6%變性膠，95瓦1000伏預(yù)電泳20分鐘，1倍的TBE緩沖液，上樣量3ul. PCR反應(yīng)條件： 預(yù)變性：94℃，5min 變 性：94℃，30s 退 火：55℃，30s 延 伸：72℃，40s 34個循環(huán) 延 伸：72℃，8min 保 存：4℃ PCR反應(yīng)體系：10×Buffer 1.25 ul，dNTP (2.5mM) 1 ul，Primer1(2uM) 1 ul，Primer2(2uM) 1 ul，dH2O 6.55 ul，Taq(5u/ul) 0.2 ul，模板DNA 1.5 ul。 |
3樓2012-05-29 19:40:22
ymma213
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固定液： 100ml冰醋酸加入900 ml去離子水。 銀染液： 1升水中加入1.2gAg ,再加入1500ul甲醛。 顯影液： 1升水中加入20gNaOH、1000ul甲醛和200 ul硫代硫酸鈉，放入4℃冰箱預(yù)冷半小時以上。 銀染過程： 固定 取合適的塑料盆加入1L新配制的10％冰醋酸溶液，輕輕搖動20分鐘，至指示劑消色為止。 沖洗 去離子水水洗10分鐘，最好分兩次，每次5分鐘。 銀染 加入染色液銀染30分鐘。 顯影 銀染后用水快速沖洗（小于5秒），然后快速放入提前配好的顯影液中顯影。 固定 轉(zhuǎn)入10％冰醋酸溶液，輕輕搖動3-5分鐘。 沖洗 去離子水水洗2-3分鐘。 干燥 室溫下自然干燥，凝膠成像系統(tǒng)記錄實驗結(jié)果。 |
7樓2012-05-30 11:35:30
2樓2012-05-28 21:34:32
4樓2012-05-29 20:30:58
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5樓2012-05-30 09:06:04
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6樓2012-05-30 11:29:49
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8樓2012-05-31 08:56:04
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9樓2012-05-31 11:23:08
10樓2012-07-16 13:08:12
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