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kabuqinuo89新蟲 (小有名氣)
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[求助]
細(xì)菌用什么破碎會(huì)比較好呢
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我進(jìn)行試驗(yàn)的細(xì)菌基因組的長(zhǎng)度大約是23kb，用什么方法破碎可以使其長(zhǎng)度變成大月2000-3000bp左右的呢 求高手幫忙，萬分感謝啊！ |
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籠統(tǒng)的說，有三類方法。 物理法：用機(jī)械力破壞基因組。 化學(xué)法：用一些有機(jī)試劑來使基因組破壞。 生物法：一般常用的是酶法。 物理法的效果不是很好，獲得的片段大小不易控制，且多有損失； 化學(xué)法一般都有毒性，并且后期還要較為復(fù)雜的后處理； 酶法條件溫和，獲得的片段大小一般可以提前預(yù)知，但是僅限于基因組的結(jié)構(gòu)（或是酶切位點(diǎn)分布）清楚的情況。后處理也比較簡(jiǎn)單。也可以多個(gè)酶同時(shí)酶切（注意buffer）。 我個(gè)人建議使用酶切法。因?yàn)橐蟛皇呛車?yán)格的話，即便是不清楚酶切位點(diǎn)分布，還是一樣可以切，切完之后電泳檢測(cè)就ok了。若還為達(dá)到要求，就繼續(xù)切。但是最后能否使片段都在2000-3000的范圍，我就不能保證了。 當(dāng)然，你也可以將幾種方法結(jié)合起來用。效果說不定更好。 |
6樓2012-05-29 08:57:55
dongniaoxin
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響當(dāng)當(dāng)?shù)哪绢^
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