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PAMAM樹狀化合物作為呼吸道合胞病毒基因 疫苗遞送載體的研究
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DNA疫苗能刺激機體產(chǎn)生細胞免疫與體液免疫,其制造成本低廉,易于儲存及運輸。但是,裸DNA疫苗在體內(nèi)傳輸過程中,很容易被酶水解,不能引起足夠的免疫原性,很難達到好的免疫保護效果。DNA遞送載體能夠保護DNA分子不被酶水解。本課題選取聚酰胺.胺(PAMAM)樹狀化合物作為基因疫苗遞送載體,通過細胞毒性實驗及細胞凋亡實驗研究了PAMAM G4及PAMAM G5在多種細胞系中的毒性,在此基礎(chǔ)上初步探索了該樹狀化合物作為人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus.RSV) 基因疫苗載體的在動物模型上應(yīng)用。 選取多個不同的電荷(N/P)比,制備PAMAM/DNA復(fù)合物,瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果表明,PAMAM G4及PAMAM G5都能夠與DNA形成復(fù)合物。酶切保護實驗結(jié)果表明,形成復(fù)合物后,DNA不被核酸酶降解,即PAMAM能夠有效保護所攜帶的DNA分子不被降解。為進一步探索PAMAM的細胞毒性,分別選取了HEK293細胞、HepG2細胞、U251細胞及A549細胞進行毒性實驗。結(jié)果表明,對于同種細胞系PAMAM G5的細胞毒性高于PAMAM(34的細胞毒性。PAMAM(M 48 h的半抑制率在0.1μg/mL,而PAMAM G5 48 h的半抑制率在0.05μg/mL。對于同一種PAMAM載體,隨著濃度的增加毒性增大,細胞毒性呈現(xiàn)劑量依賴性。細胞凋亡實驗結(jié)果表明,PAMAM在加入24 h后能夠?qū)е乱恍┘毎麎乃阑蛲砥诘蛲觯缙诘蛲霈F(xiàn)象不明顯,同時,細胞壞死或晚期凋亡程度也呈現(xiàn)劑量依賴性,與MTT檢測結(jié)果一致。在以上實驗的基礎(chǔ)上,選取N/P比為10:1作為免疫小鼠實驗制備PAMAM/DNA復(fù)合物的標準。小鼠免疫實驗初步結(jié)果表明經(jīng)腿部肌肉注射PAMAM/DNA復(fù)合物,小鼠產(chǎn)生相應(yīng)抗體。------------------------------------------------------------威海晨源樹枝分子 |
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