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光武故里木蟲(chóng) (小有名氣)
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請(qǐng)大家?guī)臀曳治鲆幌逻@張植物塊根中提取的基因組DNA電泳圖片
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今天下午提了一種植物塊根的基因組DNA，因?yàn)槠涓缓嗵�，使用的是改良的CTAB法，采取以下流程：首先在裝有粉狀樣品的離心管中加入2×CTAB裂解液（內(nèi)含3% PVP）600ul 以及100ul β-巰基乙醇，65℃水浴60min，然后用A【氯仿：異戊醇/24：1】以及B【酚：氯仿：異戊醇/25：24：1】交替抽提后離心，先后順序依次為：A——A——B——A——B——A，接著離心取上清液，加入-20℃預(yù)冷的異丙醇，并放置-20℃冰箱，60min后取出離心，得沉淀（但是實(shí)際情況是離心后并無(wú)可見(jiàn)的沉淀），用70%的乙醇小心洗滌2次，后用無(wú)水乙醇洗滌一次，風(fēng)干沉淀，加入100ul TE溶解。 其中離心參數(shù)為：4℃，12000rpm，10min 電泳檢測(cè)如圖所示：左邊是MARKER，最大片段長(zhǎng)5000bp，右邊是提的DNA，明顯感覺(jué)不對(duì)頭啊，請(qǐng)各位幫忙分析找找原因，十分謝謝 |
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光武故里
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2樓2012-05-21 18:43:05
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| 從你的電泳圖看，提的效果還可以啊，最上面的一條帶應(yīng)該就是基因組DNA啊，下面的是RNA，而且沒(méi)有較多多糖污染啊（稍微有一些），點(diǎn)樣孔比較干凈。不知道樓主測(cè)濃度了沒(méi)有，可以考慮純化，加RNA酶除去RNA，不過(guò)要看樓主提DNA干什么用了，呵呵！還有沉淀后離心一步應(yīng)該是有沉淀的，可能是透明狀的沒(méi)觀察到而已，而且沉淀多了也不好，大都是雜質(zhì)，不知道樓主起始材料量是多大呢？ |
3樓2012-05-22 00:04:35
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