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北京石油化工學院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告
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776142

金蟲 (正式寫手)


[交流] DNA電泳圖分析求助

跑了很多次從DH5a大腸桿菌中用合成的萃取材料分離出的DNA電泳,總是出現(xiàn)問題,操作是按照堿法裂解的方法配制溶液1,2,3同時在1中加入RNA酶,然后用合成的材料吸附洗脫,但在200處左右總出現(xiàn)很亮的條帶,加大RNA酶的濃度也無法解決,并且跑出的DNA條帶與試劑盒得到的最亮條帶也不在一條直線上,不知道是不是我用1M的NaCl洗脫后的結(jié)果,希望明白的朋友們能夠幫忙解決下,不盡感激。
DNA電泳圖分析求助
圖片3.jpg



[ Last edited by 776142 on 2013-5-21 at 10:02 ]
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youngker918

金蟲 (正式寫手)


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776142(金幣+1): 謝謝參與
776142(myprayer代發(fā)): 金幣+1, 贈人玫瑰手有余香,感謝你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-21 13:18:57
有可能啊,建議你氯化鈉洗脫后再做下脫鹽
3樓2013-05-21 10:49:53
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孤城一片

木蟲 (小有名氣)


★ ★
776142(金幣+1): 謝謝參與
776142(gyesang代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵回帖交流經(jīng)驗! 2013-05-22 00:59:58
我以前做的時候也是這樣,我一開始也是RNA酶加的量很大,后來我一般是大提,然后做一次回收,效果還行
6樓2013-05-21 14:04:21
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776142

金蟲 (正式寫手)


引用回帖:
3樓: Originally posted by youngker918 at 2013-05-21 10:49:53
有可能啊,建議你氯化鈉洗脫后再做下脫鹽

能告訴下具體的除鹽過程嗎,剛接觸這一領(lǐng)域不太懂,謝謝。我是用300微升的1M氯化鈉洗脫的,
7樓2013-05-21 14:17:39
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776142

金蟲 (正式寫手)


引用回帖:
6樓: Originally posted by 孤城一片 at 2013-05-21 14:04:21
我以前做的時候也是這樣,我一開始也是RNA酶加的量很大,后來我一般是大提,然后做一次回收,效果還行

下層的東西是RNA嗎,如果是的話為什么加RNA酶除不掉呢,在跑電泳的時候,高鹽濃度是否會是DNA降解啊,謝謝
8樓2013-05-21 14:19:15
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yxg_568

木蟲 (職業(yè)作家)



776142(金幣+1): 謝謝參與
好高深!
9樓2013-05-21 14:45:40
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gzl9901

鐵桿木蟲 (文壇精英)



776142(金幣+1): 謝謝參與
每天上小木蟲,每天搞科研!
10樓2013-05-21 15:02:12
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jinluzhang

新蟲 (初入文壇)


★ ★
776142(金幣+1): 謝謝參與
776142(gyesang代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵回帖應助! 2013-05-22 01:00:09
你試過測一下DNA的260/280嗎?我覺得你這個后面100左右那兒的亮帶像蛋白,而且你這個圖歪歪扭扭的瓊脂糖沒有充分融好,多煮一會兒。再有你試劑盒提出來怎么有雜帶呢?你的樣品最好用同一批次培養(yǎng)的大腸桿菌。
12樓2013-05-21 15:30:39
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776142

金蟲 (正式寫手)


引用回帖:
12樓: Originally posted by jinluzhang at 2013-05-21 15:30:39
你試過測一下DNA的260/280嗎?我覺得你這個后面100左右那兒的亮帶像蛋白,而且你這個圖歪歪扭扭的瓊脂糖沒有充分融好,多煮一會兒。再有你試劑盒提出來怎么有雜帶呢?你的樣品最好用同一批次培養(yǎng)的大腸桿菌。

OD值都2.1了 實在不知道怎么回事了
13樓2013-05-21 19:25:15
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mcr199301

銅蟲 (初入文壇)



776142(金幣+1): 謝謝參與
最下面那些是引物二聚體嗎
16樓2013-05-21 20:16:54
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sometimess

新蟲 (初入文壇)



776142(金幣+1): 謝謝參與
學習中、
17樓2013-05-22 09:10:39
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meiting

木蟲 (正式寫手)



776142(金幣+1): 謝謝參與
新手上路,看不懂
18樓2013-05-22 12:33:11
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huoyongting

金蟲 (正式寫手)


★ ★
776142(金幣+1): 謝謝參與
myprayer: 金幣+1, 贈人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-27 21:58:29
RNA酶的作用時間可以長一點或者買好一點的RNA酶,然后如果是異丙醇加的量太多的話也會有RNA污染的,跟試劑盒相比的話你的條帶大部分是線性化的了,可能是你加二液的時候混勻的過于劇烈了,這個注意下就好了,祝好運
19樓2013-05-22 15:20:35
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小丑兮兮

鐵蟲 (初入文壇)



776142(金幣+1): 謝謝參與
新手,學習中
20樓2013-05-22 15:52:53
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field0073

銅蟲 (小有名氣)


★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
gyesang: 金幣+2, 鼓勵回帖交流! 2013-08-27 22:27:12
引用回帖:
19樓: Originally posted by huoyongting at 2013-05-22 15:20:35
RNA酶的作用時間可以長一點或者買好一點的RNA酶,然后如果是異丙醇加的量太多的話也會有RNA污染的,跟試劑盒相比的話你的條帶大部分是線性化的了,可能是你加二液的時候混勻的過于劇烈了,這個注意下就好了,祝好運

200bp的條帶應該不是RNA,首先RNA容易降解,圖譜中如果是RNA應該很彌散,而不是這么均一(雖然也模糊);再者,已經(jīng)用RNA酶處理過,樓上有人說RNA酶可能失活,其實RNA酶很難滅活,并且酶活力較高,所以很有可能不是RNA. 我比較同意16樓說的,可能在提取過程中震蕩劇烈導致DNA斷裂,并且圖片也說明你的目的條帶與試劑盒上所給不一致,再次做的時候不要震混,多次顛倒混勻即可。
22樓2013-05-22 22:32:50
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huoyongting

金蟲 (正式寫手)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
引用回帖:
22樓: Originally posted by field0073 at 2013-05-22 22:32:50
200bp的條帶應該不是RNA,首先RNA容易降解,圖譜中如果是RNA應該很彌散,而不是這么均一(雖然也模糊);再者,已經(jīng)用RNA酶處理過,樓上有人說RNA酶可能失活,其實RNA酶很難滅活,并且酶活力較高,所以很有可能不是 ...

16樓說的是引物二聚體,引物哪里來的,而且條帶明顯在200以下
23樓2013-05-23 08:17:15
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776142

金蟲 (正式寫手)


引用回帖:
22樓: Originally posted by field0073 at 2013-05-22 22:32:50
200bp的條帶應該不是RNA,首先RNA容易降解,圖譜中如果是RNA應該很彌散,而不是這么均一(雖然也模糊);再者,已經(jīng)用RNA酶處理過,樓上有人說RNA酶可能失活,其實RNA酶很難滅活,并且酶活力較高,所以很有可能不是 ...

但我的OD值確實太大了都超過2.1了 不知道是什么原因
24樓2013-05-23 08:56:25
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field0073

銅蟲 (小有名氣)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
引用回帖:
24樓: Originally posted by 776142 at 2013-05-23 08:56:25
但我的OD值確實太大了都超過2.1了 不知道是什么原因...

OD值偏高和你樣品中的離子含量過高有關(guān)。
25樓2013-05-25 11:11:13
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昭思88

新蟲 (初入文壇)


26樓2013-08-23 16:45:42
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776142

金蟲 (正式寫手)


引用回帖:
25樓: Originally posted by field0073 at 2013-05-25 11:11:13
OD值偏高和你樣品中的離子含量過高有關(guān)。...

能詳細解釋下嗎  謝謝
27樓2013-08-27 09:12:03
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zploveme1314

新蟲 (初入文壇)


不是很懂
28樓2013-08-27 21:25:35
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weithermo

新蟲 (初入文壇)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
The bright band should be RNA. If you use the solution 1 from the kit to replace your solution 1, you may see the bright RNA band disappear. If this is the case, your solution 1 does not contain good RNase. But my question for you is why you want to use the manual alkaline lysis method not using the plasmid prep kit? It is only 1.2 RMB per prep in the market. Would it be better to spend your time somewhere else rather than do constant troubleshooting? Qiagen and Thermo Fisher Scientific and many others provide good quality kits. If you think they are expensive, you can try the ones made locally. It is important to save your time.
29樓2013-08-28 01:21:05
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mint方

銅蟲 (初入文壇)


新手學習了
30樓2014-09-28 16:52:16
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天地一微塵

鐵桿木蟲 (小有名氣)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
OD值純DNA在1.8左右,如果在1.9~2.0之間說明有RNA污染,你的大于2,而且加有RNase,排除操作失誤,或比色杯污染,有可能就是DNA溶解,試著最后用水洗脫,而不用鹽洗脫。
31樓2014-09-28 22:59:25
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簡單回復
2013-05-21 10:42   回復  
776142(金幣+1): 謝謝參與
myprayer: 金幣-1, 請勿單純表情回復。。。下不為例,謝謝合作, 2013-05-21 13:20:44
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myprayer: 金幣-1, 請勿單純表情回復。。。下不為例,謝謝合作, 2013-05-21 13:20:33
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776142(金幣+1): 謝謝參與
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51102413514樓
2013-05-21 19:54   回復  
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