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[求助]
想獲得較大量的pBR322，卻怎么也提不出來，各位大俠幫幫忙……
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我把質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌，然后搖床擴增，按照分子生物學克隆指南的中提步驟做，加入異丙醇后，離心，有沉淀，而且不少，乙醇洗，開始還有沉淀，但是等它揮發(fā)干的時候，沉淀好像不見了。就算沉淀還在，電泳后，也沒有條帶。很悲劇啊，重復了兩次了。這是為什么呢？平板含有氨芐，試管擴增時也有氨芐，三角瓶擴增時也加了氨芐，菌液濃度比較好。跟我之前用小提試劑盒提時養(yǎng)的菌是一樣的 為什么提不出來？ 各位大俠，我要怎么樣才能獲得較大量的質(zhì)粒呢？萬分感激�。�！ |
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早冰124
新蟲 (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵應(yīng)助 2012-05-30 13:43:12
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵應(yīng)助 2012-05-30 13:43:12
| 我們提質(zhì)粒都是用試劑盒的，一般要獲取大量的質(zhì)粒會增大裂解液buffer p1的用量，裂解時間也稍稍長些，3-4min, 后面的中和反應(yīng)液也相對加大，即buffer p1 到buffer p3都相應(yīng)的加大量，當然這前提是你菌體要養(yǎng)的足夠多�，F(xiàn)在也有質(zhì)粒小題中量提取試劑盒，可以試試 |
4樓2012-05-30 11:05:05
3樓2012-05-30 10:22:22
5樓2012-05-30 22:14:51
6樓2012-05-30 22:15:50
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