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xiaoyujun123

銅蟲 (初入文壇)

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[求助] DGGE做了兩次，圖片相差很大，還有空白對(duì)照也有條帶。

圖片1和圖片2是相同的樣品，屬于土壤DNA，只是每次跑DGGE都是重新跑的PCR。結(jié)果兩次相差這么大呢。高手能不能指點(diǎn)一下。究竟是什么原因造成這樣的。兩張圖片顏色很黃，背景顏色相差不是很大，染色的時(shí)候怎么去改正�；蛘咦⒁饽男┓矫�。

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1樓 2012-05-30 13:47:36

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侯云hy

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8樓: Originally posted by xiadongliang at 2012-06-08 13:46:48
純化下吧。
不知道你的PCR酶是什么公司的？一些小公司的酶不是太好，最好使用好一點(diǎn)兒的酶。雖然瓊脂糖檢測(cè)都是單一的條帶，有的公司的酶擴(kuò)增的產(chǎn)物電泳就是很好。...

我用的是TAKALA 的 EX Taq酶，這個(gè)酶可以嗎？你用的是哪個(gè)啊？

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9樓2012-06-09 09:45:16

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xiadongliang

金蟲 (正式寫手)

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西瓜: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-06-06 18:39:55

首先從跑膠的結(jié)果來(lái)看，PCR產(chǎn)物可能不夠好。每個(gè)泳道上部都有很深的背景色。
其次，配置的DGGE凝膠每次可能會(huì)有所不同，另外電泳條件的改變特別是電泳時(shí)間的變化對(duì)電泳結(jié)果也會(huì)有一定的影響。

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3樓2012-06-01 10:30:48

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樹上的魚X

銅蟲 (初入文壇)

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
西瓜: 金幣+2, Good！ 2012-06-06 18:40:02

你的是用的銀染方法吧第二張圖條帶感覺(jué)還可以第一張圖片顏色背景色偏深偏黃應(yīng)該是染色時(shí)間偏長(zhǎng)造成的

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4樓2012-06-06 15:18:10

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侯云hy

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引用回帖:

3樓: Originally posted by xiadongliang at 2012-06-01 10:30:48
首先從跑膠的結(jié)果來(lái)看，PCR產(chǎn)物可能不夠好。每個(gè)泳道上部都有很深的背景色。
其次，配置的DGGE凝膠每次可能會(huì)有所不同，另外電泳條件的改變特別是電泳時(shí)間的變化對(duì)電泳結(jié)果也會(huì)有一定的影響。

你好，我也遇到相同的困難，如果說(shuō)泳道顏色比較深是因?yàn)镻CR不好，那該怎樣優(yōu)化啊？我已經(jīng)做了巢式和降落了，但是還是顏色深。求指教啊。

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5樓2012-06-07 18:18:21

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