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分子結(jié)構(gòu)金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
今天你純化蛋白了嗎？跪求柱子掛不好的原因。。。。 已有1人參與
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最近純化蛋白，各種柱子搞得晚上睡覺(jué)都在過(guò)柱子。。。。做過(guò)純化的童鞋，你們懂的。。。。。。 但是最近結(jié)果總不理想，我將樣品脫鹽后過(guò)Hitrap Q FF柱，穿透（前兩個(gè)收集管中）中有時(shí)會(huì)有酶活，然后在第7、8、9管（鹽濃度是14%左右）中我的蛋白就洗下來(lái)了，這種狀況讓我真的有點(diǎn)無(wú)能為力了。都不知道是何原因，該如何改進(jìn)，我升高過(guò)pH，也掛不住。 我的緩沖液：20mM tris-hcl， 2MNacl+20mMtris-hcl. 希望各位純化專家能給我解答一下，謝謝。。。。 |
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2樓2012-05-31 10:29:25
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【答案】應(yīng)助回帖
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zhang8826857: 金幣+2, 歡迎來(lái)微生物板塊交流哦^_^ 2012-06-02 10:41:05
zhang8826857: 金幣+2, 歡迎來(lái)微生物板塊交流哦^_^ 2012-06-02 10:41:05
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硫酸銨脫鹽后有沒(méi)有用氯化鋇鑒定鹽是否去除完全？這個(gè)酶的pH是多少？掛柱條件是什么？ 如果是天然篩選的菌，這種酶有很多同工酶，有時(shí)pI值相差較大，是會(huì)出現(xiàn)一部分掛上，一部分沒(méi)掛上。 離子交換條件很重要，有時(shí)相差一點(diǎn)，效果也會(huì)相差很多。 |
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分子結(jié)構(gòu)6樓2012-06-01 23:28:01
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7樓2012-06-02 00:13:13
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8樓2012-06-02 06:22:38
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9樓2012-06-02 18:05:40
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10樓2012-06-02 18:05:48
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