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yingyangyang
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[求助]
求解：末端補(bǔ)平原理
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| 將DNA超聲打斷后，形成3’和5’突出末端，用酶和dNTP進(jìn)行末端補(bǔ)平，形成3’和5’平末端。求解這個(gè)具體的原理是怎么樣的，這個(gè)酶是怎么起作用的，好像是至少有兩種酶在起作用。 |
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 二代測(cè)序 | 核酸方面 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-06-05 14:07:15
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Klenow Fragment，又稱(chēng)Klenow片段，是大腸桿菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片斷(Large Fragment)。Klenow Fragment保留了DNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5'→3'外切酶活性。Klenow Fragment的3'→5'外切酶活性保證了其合成DNA時(shí)的準(zhǔn)確性(proofreading)。 特點(diǎn)：對(duì)于5'突出或3'突出的粘末端都可以催化產(chǎn)生平末端，用于后續(xù)的平端連接。 用途：雙鏈DNA 5'突出(5'overhang)末端的補(bǔ)平(fill-in)；雙鏈DNA 3'突出(3'overhang)的打平(也稱(chēng)削平)；5'突出末端的標(biāo)記；隨機(jī)引物法進(jìn)行DNA標(biāo)記；Sanger雙脫氧法進(jìn)行DNA測(cè)序；cDNA第二鏈的合成或定點(diǎn)突變反應(yīng)第二鏈的合成。 來(lái)源：由大腸桿菌表達(dá)，表達(dá)基因的來(lái)源為polA 基因片段。 活性定義：37℃30分鐘時(shí)間內(nèi)，催化10nmol脫氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定義為1個(gè)活性單位。 |
2樓2012-06-05 09:06:54
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3樓2012-06-06 11:20:27
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4樓2012-06-06 11:21:43
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