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[交流] 蛋白表達量的提高

最近用pET32a為載體表達一蛋白（30多KD），發(fā)現(xiàn)產(chǎn)量太低了，想通過優(yōu)化培養(yǎng)基配方（如添加甘油等）提高其表達量，但一直不見效果，求解答。

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【求助/交流】基因工程菌誘導蛋白表達的問題已經(jīng)有14人回復

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1樓 2012-06-05 08:44:56

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增加IPTG濃度

3樓2012-06-05 08:56:20

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scelab: 金幣+2, 謝謝回復哦~ 2012-06-06 23:01:28

優(yōu)化溫度；IPTG濃度；實在不行只能進行密碼子優(yōu)化.

8樓2012-06-05 13:05:41

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誘導型表達載體，增加誘導劑的量是促進表達的方法，試試看

9樓2012-06-05 14:47:20

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從頭找原因

10樓2012-06-06 08:23:39

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加入IPTG，優(yōu)化一下誘導的濃度、時間和溫度，再試試從對數(shù)期開始誘導

12樓2012-06-06 11:35:33

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chz16160520

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無論你怎么折騰有些蛋白的表達量就是那么低，我現(xiàn)在就是！你可以嘗試換一下菌種，或者用酵母來表達（如果基因來源于真核生物）

14樓2012-06-06 22:34:37

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14樓: Originally posted by chz16160520 at 2012-06-06 22:34:37
無論你怎么折騰有些蛋白的表達量就是那么低，我現(xiàn)在就是！你可以嘗試換一下菌種，或者用酵母來表達（如果基因來源于真核生物）

我的是一個原核生物的抗原，連上了CTB佐劑，用的載體是pET32a，菌株是BL21（DE3），現(xiàn)在表達的量總共有50mg/L,其中以包涵體形式表達占了一半，我想提高表達量同時增加以可溶性形式表達

15樓2012-06-07 08:24:19

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lily_han

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難啊，我一個蛋白折騰半年了，可溶的表達量就那么點，純化也困難

16樓2012-06-07 10:00:15

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可以分析一下密碼子，尤其是前20個氨基酸的密碼子，優(yōu)化一下。

17樓2012-06-15 15:16:42

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各種條件優(yōu)化啊，篩選高表達菌株啊。

18樓2012-06-15 16:22:44

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limin2012

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優(yōu)化培養(yǎng)基效果不大。應改變溫度，IPTG濃度和通氣等條件。

19樓2012-06-15 17:16:31

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limin2012

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換掉稀有密碼子，使用大腸桿菌喜好密碼。

20樓2012-06-15 17:21:51

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zfhist

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愛莫能助。

21樓2012-06-15 19:43:24

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zfhist

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實在抱歉。

22樓2012-06-15 19:43:42

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表達量低主要問題還是誘導的問題，而你卻去做了優(yōu)化，優(yōu)化了培養(yǎng)基只能讓菌體長得更好，菌體量多了，可能表達量也對應增加；但是如果誘導的問題沒有解決，菌體量再多也無濟于事。所以建議從這個入手。如果你的啟動子之類的沒有問題，如樓上說的加IPTG是一種措施，但是不能夠解決所有問題。表達量低原因有很多，最直接的就是IPTG誘導的問題；還有溶氧的問題；還有誘導時溫度的問題，pH的問題。你必須結合你的菌，來做調整。一般誘導時溫度要比未誘導前低，比如大腸桿菌的發(fā)酵最好是37°，但是誘導后就要調到30°。

23樓2012-06-15 20:25:46

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23樓: Originally posted by 416114799 at 2012-06-15 20:25:46
表達量低主要問題還是誘導的問題，而你卻去做了優(yōu)化，優(yōu)化了培養(yǎng)基只能讓菌體長得更好，菌體量多了，可能表達量也對應增加；但是如果誘導的問題沒有解決，菌體量再多也無濟于事。所以建議從這個入手。如果你的啟動子 ...

這誘導方面我也進行了優(yōu)化，但是蛋白的量還是沒有很明顯的提高，關于溶氧的問題，不知道怎么測定溶氧量？

24樓2012-06-16 10:09:14

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24樓: Originally posted by 675250244 at 2012-06-16 10:09:14
這誘導方面我也進行了優(yōu)化，但是蛋白的量還是沒有很明顯的提高，關于溶氧的問題，不知道怎么測定溶氧量？...

不會是你發(fā)酵沒有測定溶氧吧？溶氧是非常關鍵的，在表達與生長過程中。我們都是用自動溶氧電極。難不成你的發(fā)酵罐沒有這個玩意兒？

25樓2012-06-16 11:51:37

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