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hubohuna新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
雙酶切，切不下來(lái)
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小弟第一次夠載體，片段大小大約一千三，酶切位點(diǎn)為hind111&noc1（沒(méi)有設(shè)置保護(hù)堿基），之前切t載體，切載體，切片段都是成功的，然后將目的片段和載體連接導(dǎo)入大腸桿菌后，涂板子，挑菌落，做菌落pcr，顯示有帶，做質(zhì)粒pcr驗(yàn)證顯示也有目的帶（可不可以說(shuō)，片段是連到質(zhì)粒上去了的？）但是酶切沒(méi)結(jié)果，單酶切和雙酶切條帶基本一樣。這個(gè)問(wèn)題困擾我近半個(gè)月了，反反復(fù)復(fù)做了好幾次都一樣。 ps.質(zhì)粒是用安比奧的試劑盒提的。 求大神幫忙指點(diǎn)，感激不盡！ [ Last edited by 1949stone on 2012-6-9 at 13:02 ] |
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蝸牛061610
木蟲(chóng) (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-06-11 13:56:14
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-06-11 13:56:14
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個(gè)人認(rèn)為酶切驗(yàn)證比較靠譜，我用一個(gè)質(zhì)粒連接1kb的產(chǎn)物，空質(zhì)粒照樣能批出1kb條帶，所以有時(shí)候pcr驗(yàn)證不很靠譜。估計(jì)樓主是沒(méi)有連接上，長(zhǎng)出的克隆或許是因?yàn)殡p切不充分，造成單切自連的（兩個(gè)酶切位點(diǎn)挨的太緊的話，雙酶切不好切，你大致看看兩個(gè)切點(diǎn)的距離）。 最好還是你雙切能驗(yàn)證出片段。 |
12樓2012-06-11 09:27:18
hubohuna
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2樓2012-06-08 18:44:58
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
3樓2012-06-08 18:51:59
jimjohntall
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4樓2012-06-08 19:32:24
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