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hubohuna新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
雙酶切，切不下來(lái)
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小弟第一次夠載體，片段大小大約一千三，酶切位點(diǎn)為hind111&noc1（沒(méi)有設(shè)置保護(hù)堿基），之前切t載體，切載體，切片段都是成功的，然后將目的片段和載體連接導(dǎo)入大腸桿菌后，涂板子，挑菌落，做菌落pcr，顯示有帶，做質(zhì)粒pcr驗(yàn)證顯示也有目的帶（可不可以說(shuō)，片段是連到質(zhì)粒上去了的？）但是酶切沒(méi)結(jié)果，單酶切和雙酶切條帶基本一樣。這個(gè)問(wèn)題困擾我近半個(gè)月了，反反復(fù)復(fù)做了好幾次都一樣。 ps.質(zhì)粒是用安比奧的試劑盒提的。 求大神幫忙指點(diǎn)，感激不盡！ [ Last edited by 1949stone on 2012-6-9 at 13:02 ] |
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hubohuna
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2樓2012-06-08 18:44:58
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3樓2012-06-08 18:51:59
jimjohntall
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4樓2012-06-08 19:32:24
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5樓2012-06-09 08:45:17
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8樓2012-06-09 12:29:30
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-06-13 13:39:37
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| 又看到很多做PCR驗(yàn)證的�；旧螾CR驗(yàn)證假陽(yáng)性很多，我有個(gè)師姐用空載質(zhì)粒做PCR驗(yàn)證都可以P出大小與陽(yáng)性一致的條帶。所以PCR驗(yàn)證是下下策。能酶切驗(yàn)證的盡量酶切驗(yàn)證。另外看你開(kāi)始的描述，沒(méi)有帶保護(hù)堿基的片段很多酶都切不開(kāi)的。自然后面也連不進(jìn)去，所以，你長(zhǎng)出的單菌落很有可能是只切了一刀的載體自連了。 |
9樓2012-06-10 14:34:34
★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流 2012-06-13 13:39:59
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10樓2012-06-10 16:02:57
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