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大曲微生物的菌落計數(shù)法的詳細步驟（包括藥品的配制）
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2樓2012-06-11 09:38:04
3樓2012-06-11 10:18:54
chenliangqiang
金蟲 (小有名氣)
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4樓2012-06-11 14:25:26
5樓2012-06-11 17:50:45
6樓2012-06-11 18:44:13
【答案】應助回帖
★ ★
東方蘇六: 金幣+2, ★有幫助 2012-06-12 21:16:03
東方蘇六: 金幣+2, ★有幫助 2012-06-12 21:16:03
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微生物的菌落計數(shù)法應在潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進行。檢驗全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止再污染。 稀釋液:pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液。 供試品制備方法如下：取供試品10g，加pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液至100ml，充分搖勻即可。 檢查法： 1.平皿法：采用10倍遞增稀釋法對供試液進行逐步稀釋，制備2～3個稀釋級的供試液，每一稀釋級每種培養(yǎng)基至少注2～3個平皿，注皿時，將1ml供試液慢慢全部注入平皿中，管內(nèi)無殘留液體，防止反流到吸管尖端部。陰性對照：用1支1ml吸管吸取稀釋劑各1ml，分別注入4個平皿中。將預先配制好的霉菌、酵母菌計數(shù)用的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基溶化，冷至約45℃，傾注上述各個平皿約15ml，以順時針或逆時針方向快速旋轉(zhuǎn)平皿，使供試液或稀釋液與培養(yǎng)基混勻，放潔凈工作臺上待凝，凝固后于培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)。 注意事項： 1.在作10倍遞增稀釋時，吸管插入第1級稀釋液內(nèi)不低于液面2.5cm，反復吸吹約10次。吸液時，應先吸至高于吸管上部刻度少許，然后提起吸管，貼于試管內(nèi)壁，調(diào)整液面至刻度，吸管移至第2級稀釋管的內(nèi)壁近液面處（勿接觸液面），緩慢地放出全部供試液，然后換另一吸管進行下一步稀釋。 2.從低稀釋級到高稀釋級操作時，必須換吸管；從高稀釋級到低稀釋級操作時，可以使用同一支吸管。 3.供試液稀釋及注皿時應振搖后取均勻供試液，以免造成實驗誤差。 方法二：薄膜過濾法： 1.取相當于每張濾膜含1g或1ml供試品的供試液直接過濾，或加至適量稀釋劑中，混勻，過濾。若供試品每1g或1ml所含菌數(shù)較多時，可取適宜稀釋級的供試液1ml，過濾。用pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液或其他適宜的沖洗液沖洗濾膜，沖洗方法和沖洗量要驗證。沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上，倒置培養(yǎng)。至少制備一張濾膜。每片濾膜上的菌落數(shù)應不多于100個。如菌落數(shù)超過100個，不便計數(shù)時，可取高稀釋級的供試液同法操作，點計濾膜上的菌落數(shù)。 2.陰性對照試驗:取試驗用的稀釋液1ml，照上述濾膜過濾法操作，作為陰性對照。陰性對照不得有菌生長。 注意事項： 1.采用濾膜過濾法，濾膜孔徑應不大于0.45μm，直徑一般為50mm，使用時，保證濾膜在過濾前后的完整性。若采用其他直徑的濾膜，沖洗量應進行相應的調(diào)整。 2.水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以濕潤濾膜。油類供試品，其濾膜和過濾器在使用前應充分干燥。為發(fā)揮濾膜的最大過濾效率，應注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100ml。每片濾膜的總過濾量不宜過大，以避免濾膜上的微生物受損傷。 培養(yǎng)：23～28℃培養(yǎng)5～7天。 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基：蛋白胨5.0g,磷酸二氫鉀1.0g,玫瑰紅鈉0.0133g,硫酸鎂0.5g,葡萄糖10.0g,瓊脂14.0g. |
7樓2012-06-12 13:02:20
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