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蝸牛061610木蟲 (小有名氣)
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[求助]
用Ecor1單切點，連接一片斷，都是反向連接。瘋掉了，求救求救
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質(zhì)粒10000bp，連接片段3400bp。 片段連接T載，質(zhì)粒經(jīng)過酶切后，直接CIAP去磷酸化1h后膠回收； 片段在T載上，也是酶切后回收。 剛開始長出的陽性菌有30個，只有1個為空載，其它全部連接上片段，用Pst1鑒定，正向連接可以切出900bp、2400bp、9600bp條帶，反向連接可以切出2400、2600、8000條帶。鑒定結(jié)果全為2400、2600和7000片段。后又重新制備材料，重新連接，共長出10個陽性菌，經(jīng)過鑒定還是如此，沒辦法，又送去測序，測序結(jié)果顯示也全部為反向連接。 求高人求救，連接了3周了，沒挑出一個正向連接的，瘋掉了快。  |
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