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淺淺20110418金蟲 (小有名氣)
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[求助]
【求助】酶切分型結果不穩(wěn)定
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各位高手： 求助一下關于酶切分型的問題，最近在做酶切分型實驗，預實驗比較順利，直接出了結果，但是后來重復時總是時而成功，時而失敗，很不穩(wěn)定，具體會出現(xiàn)如下一些情況： 1、酶切55度，過夜，有時會有較多的水分蒸發(fā)到壁上（離心下來還是原來的體系），這樣基本就會失敗了，但一樣的溫度也不是每次都會蒸發(fā)特別多，較少時結果還是可以的。有沒有什么辦法能夠蒸發(fā)較少？有人說要放在一個相對密閉的環(huán)境，例如水浴時在上邊加一個塑料蓋子漂在水上，這樣有道理嗎？還是只是一種偶然的成功？ 2、酶切分型的兩條帶相差70bp,跑電泳時300伏需要跑15到20分鐘，但是要是做一塊大膠，一次跑96個樣本的那種（因為我要分型的樣本特別多）越往下邊會跑的越慢，就需要時間更長，但這樣的話一些淡的條帶就會看不見了，有沒有什么辦法能解決？（我現(xiàn)在用的是2.0的膠，要區(qū)分的是350和420的片段） 3、附件的這個圖出現(xiàn)了兩回，不知道什么原因，就是沒切開，且是向上凸的弧形，用的是500的marker，marker是正常的，所以可能還是酶切的問題，條帶的位置是差不多對的，看到這個圖我就沒有接著再跑電泳了，所以marker沒分很開。請問一下這個圖出現(xiàn)的原因是什么，怎么避免？ |
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