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淺淺20110418金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
【求助】酶切分型結(jié)果不穩(wěn)定
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各位高手： 求助一下關(guān)于酶切分型的問(wèn)題，最近在做酶切分型實(shí)驗(yàn)，預(yù)實(shí)驗(yàn)比較順利，直接出了結(jié)果，但是后來(lái)重復(fù)時(shí)總是時(shí)而成功，時(shí)而失敗，很不穩(wěn)定，具體會(huì)出現(xiàn)如下一些情況： 1、酶切55度，過(guò)夜，有時(shí)會(huì)有較多的水分蒸發(fā)到壁上（離心下來(lái)還是原來(lái)的體系），這樣基本就會(huì)失敗了，但一樣的溫度也不是每次都會(huì)蒸發(fā)特別多，較少時(shí)結(jié)果還是可以的。有沒(méi)有什么辦法能夠蒸發(fā)較少？有人說(shuō)要放在一個(gè)相對(duì)密閉的環(huán)境，例如水浴時(shí)在上邊加一個(gè)塑料蓋子漂在水上，這樣有道理嗎？還是只是一種偶然的成功？ 2、酶切分型的兩條帶相差70bp,跑電泳時(shí)300伏需要跑15到20分鐘，但是要是做一塊大膠，一次跑96個(gè)樣本的那種（因?yàn)槲乙中偷臉颖咎貏e多）越往下邊會(huì)跑的越慢，就需要時(shí)間更長(zhǎng)，但這樣的話(huà)一些淡的條帶就會(huì)看不見(jiàn)了，有沒(méi)有什么辦法能解決？（我現(xiàn)在用的是2.0的膠，要區(qū)分的是350和420的片段） 3、附件的這個(gè)圖出現(xiàn)了兩回，不知道什么原因，就是沒(méi)切開(kāi)，且是向上凸的弧形，用的是500的marker，marker是正常的，所以可能還是酶切的問(wèn)題，條帶的位置是差不多對(duì)的，看到這個(gè)圖我就沒(méi)有接著再跑電泳了，所以marker沒(méi)分很開(kāi)。請(qǐng)問(wèn)一下這個(gè)圖出現(xiàn)的原因是什么，怎么避免？ |
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