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愛(ài)莫若月

木蟲(chóng) (小有名氣)

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[交流] 關(guān)于枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)化的問(wèn)題~

我近期做了枯草芽孢桿菌的電轉(zhuǎn)化，用的載體在大腸桿菌表現(xiàn)氨芐抗性（100ug/ml），在枯草芽孢桿菌是紅霉素（0.3ug/ml）抗性。轉(zhuǎn)化后涂平板的時(shí)候弄錯(cuò)了抗性，加了氨芐進(jìn)去，第二天居然也長(zhǎng)了菌落出來(lái)，不解，這是其一；加紅霉素的也長(zhǎng)了很多菌落，我挑了氨芐平板上的菌落做菌落PCR，沒(méi)有轉(zhuǎn)化的沒(méi)P出來(lái)，質(zhì)粒以及轉(zhuǎn)化的都有條帶，然后我又提沒(méi)轉(zhuǎn)化的枯草芽孢桿菌和轉(zhuǎn)化的菌的質(zhì)粒，再P，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化的可以P出來(lái)我的目的條帶，這是正常的，但是沒(méi)轉(zhuǎn)化的也P出來(lái)?xiàng)l帶了，搞不懂為什么？有沒(méi)有人可以解答一下�。�

[ Last edited by 愛(ài)莫若月 on 2012-6-21 at 10:50 ]

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1樓 2012-06-20 18:11:26

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老夏853

鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

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3樓: Originally posted by 愛(ài)莫若月 at 2012-06-21 10:52:46
沒(méi)轉(zhuǎn)化質(zhì)粒的枯草芽孢桿菌，作為陰性對(duì)照~抗生素我就是配好加進(jìn)去的呀~紅霉素的濃度太低了，我都不知道起不起作用啊~點(diǎn)擊條件是2kv，1mm，電擊常數(shù)是4.0~4.5...

我也在做枯草芽孢桿菌的電擊轉(zhuǎn)化，能否共享下你的實(shí)驗(yàn)方法。包括點(diǎn)轉(zhuǎn)培養(yǎng)基什么的，詳細(xì)指點(diǎn)下可以不？

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4樓2012-06-21 11:03:36

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老夏853

鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

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★
愛(ài)莫若月(金幣+1): 謝謝參與

。。我不知道我理解不行還是你敘述的太迷糊。后面怎么來(lái)了個(gè)沒(méi)有轉(zhuǎn)化的是什么。能不能描述的再清楚些。

氨芐平板和紅霉素平板都長(zhǎng)了，注意下抗生素的使用方法是不是正確。

另外我想問(wèn)下你轉(zhuǎn)化的枯草芽孢桿菌的具體電擊條件，轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒是什么質(zhì)粒。質(zhì)粒全長(zhǎng)有多少。。

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2樓2012-06-21 09:23:02

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愛(ài)莫若月

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引用回帖:

2樓: Originally posted by 老夏853 at 2012-06-21 09:23:02
。。我不知道我理解不行還是你敘述的太迷糊。后面怎么來(lái)了個(gè)沒(méi)有轉(zhuǎn)化的是什么。能不能描述的再清楚些。

氨芐平板和紅霉素平板都長(zhǎng)了，注意下抗生素的使用方法是不是正確。

另外我想問(wèn)下你轉(zhuǎn)化的枯草芽孢桿菌 ...

沒(méi)轉(zhuǎn)化質(zhì)粒的枯草芽孢桿菌，作為陰性對(duì)照~抗生素我就是配好加進(jìn)去的呀~紅霉素的濃度太低了，我都不知道起不起作用啊~點(diǎn)擊條件是2kv，1mm，電擊常數(shù)是4.0~4.5

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3樓2012-06-21 10:52:46

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l68266152

銀蟲(chóng) (小有名氣)

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★
愛(ài)莫若月(金幣+1): 謝謝參與

如果你確定模板沒(méi)有污染的話，那么說(shuō)明未轉(zhuǎn)化的菌你也有你的目的條帶或同源度很高的片段，檢測(cè)時(shí)選用質(zhì)粒上得抗性片段，或者交叉引物檢測(cè)

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6樓2012-06-21 13:33:49

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