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wangchangs銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
納豆激酶的測定方法 已有2人參與
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| 請問測定納豆激酶的比較好的方法是什么？我查看文獻，最常用的是瓊脂糖——纖維蛋白平板法，但我沒有找到具體操作步驟，請問大家誰有具體的操作步驟，可以共享下！ |
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tianzhibin
至尊木蟲 (著名寫手)
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3樓2014-04-11 11:21:15
釋天1
銅蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
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(1)試劑0．01mol／L磷酸鹽緩沖液(pH7．8) 取磷酸氫二鈉3．58g，加水 使溶解并稀釋至1000mL為A液；取磷酸二氫鈉(NaH PO ·2H 0)0．78g，加水使溶解并稀釋至500mL為B 液；將A、B兩液混合至pH值為7．8。 工作溶液取0．01 mol／L磷酸鹽緩沖液(pH7．8)與0．9％氯化鈉溶液(1：17)混合。 1．5％瓊脂糖溶液取瓊脂糖1．5g，加工作溶液100mL加熱溶解。 纖維蛋白原溶液取纖維蛋白原適量，加工作溶液制成每lmL中含1．5mg的可凝蛋白溶液。 凝血酶溶液取凝血酶，加0．9％氯化鈉溶液制成每1mL中含1 BP單位的溶液。 (2)標準品溶液的制備 取蚓激酶標準品，用0．9％氯化鈉溶液制成濃度分別為每lmL中含10000， 8000，6000，4000，2000蚓激酶單位的溶液。 (3)供試品溶液的制備取本品適量，加0．9％氯化鈉溶液使溶解并稀釋成標準曲線范圍內(nèi)的濃度。 (4)測定法取纖維蛋白原溶液39mL，置燒杯中，邊攪拌邊加入55℃瓊脂糖溶液39mL、凝血酶溶液 3．0mL，立即混勻，快速倒入直徑14cm塑料培養(yǎng)皿中，室溫水平放置1小時，打孔。精密量取不同濃度的蚓 激酶標準品溶液及供試品溶液各10 ，分別點在同一平皿中，加蓋，置37℃恒溫箱中反應(yīng)18小時。取出后 用卡尺測量溶圈垂直兩直徑，以蚓激酶標準品單位數(shù)的對數(shù)為橫坐標，垂直兩直徑乘積的對數(shù)為縱坐標，計 算回歸方程，將供試品垂直兩直徑乘積的對數(shù)代人回歸方程，計算供試品效價單位數(shù)。標準品與供試品應(yīng)各 做兩點，以平均值計算。 |
2樓2014-04-11 09:36:16
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