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sunny2012622新蟲 (初入文壇)
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我想做苜�？篃峄蜻@一方面，但是現(xiàn)在思緒很亂，不知道從何入手，望高手指點(diǎn)
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| 我想做苜�？篃峄蜻@一方面，但是現(xiàn)在思緒很亂，不知道從何入手，望高手指點(diǎn) |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 很熱心的蟲蟲 2012-06-26 16:41:36
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小丹木木: 金幣+3, 很熱心的蟲蟲 2012-06-26 16:41:36
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你師兄消減雜交得到的cDNA就是苜蓿分別在高溫和常溫兩種條件下差異表達(dá)的cDNA了吧？如果是這樣的話接下來(lái)應(yīng)該就如3L、4L所說(shuō)那樣做了，值得注意的是拿到感興趣的cDNA片段序列后既可以用race拉基因全長(zhǎng)，也可以根據(jù)EST信息拼基因全長(zhǎng)，不過(guò)通常前者更可靠。 得到幾個(gè)你認(rèn)為可能的候選基因后可以先做做southern和real time PCR，驗(yàn)證該基因到底是不是在高溫時(shí)特異表達(dá)及表達(dá)量有何變化等； 接下來(lái)就是轉(zhuǎn)基因了，能轉(zhuǎn)苜蓿最好，不能的話就只好轉(zhuǎn)模式植物，轉(zhuǎn)后同樣需要用southern或real time PCR等手段驗(yàn)證基因的表達(dá)，若是表達(dá)的話再進(jìn)行表型驗(yàn)證（就是看它到底是不是比一般的更耐熱）。 想做得深點(diǎn)還可以把相應(yīng)的蛋白質(zhì)給找出來(lái)神馬的…… ps：我沒(méi)做過(guò)該實(shí)驗(yàn)，以上內(nèi)容僅供參考。 |
7樓2012-06-25 22:58:19
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sunny2012622
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【答案】應(yīng)助回帖
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如果要接著你師兄的往下做，那么有一個(gè)思路供你參考： 先對(duì)文庫(kù)克隆測(cè)序（如果你師兄沒(méi)有做的話），然后進(jìn)行blast分析這些cDNA片段，找到可能跟耐熱/抗熱相關(guān)的基因片段，然后做race把這個(gè)基因的全長(zhǎng)得到。接著就可以表達(dá)這個(gè)完整的基因或者是部分。拿到蛋白了，就可以進(jìn)行后續(xù)的功能相關(guān)的實(shí)驗(yàn)了。 |
4樓2012-06-25 17:07:17
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